Due metodi di osservazione microscopica comunemente usati
1, Osservazione in campo oscuro
Il campo visivo oscuro è in realtà un'illuminazione in campo oscuro. Le sue caratteristiche sono diverse dal campo visivo chiaro, in quanto non osserva direttamente la luce illuminante, ma osserva piuttosto la luce riflessa o diffratta dell'oggetto da ispezionare. Pertanto, il campo visivo diventa uno sfondo scuro, mentre l'oggetto da ispezionare presenta un'immagine luminosa
Il principio del campo oscuro si basa sul fenomeno ottico Tyndall, per cui le particelle di polvere non possono essere osservate dall'occhio umano quando esposte a una forte luce a causa della diffrazione causata da una forte luce. Se la luce viene proiettata obliquamente su di essa, le particelle sembrano aumentare di volume a causa della riflessione della luce, rendendole visibili all'occhio umano
L'accessorio speciale richiesto per l'osservazione in campo oscuro è un faretto per campo oscuro. La sua caratteristica è che non consente al raggio di luce di attraversare l'oggetto dal basso verso l'alto, ma modifica il percorso della luce per essere diretto obliquamente verso l'oggetto, in modo che la luce di illuminazione non entri direttamente nella lente dell'obiettivo, e utilizzi l'immagine chiara formata dalla luce di riflessione o diffrazione sulla superficie dell'oggetto da ispezionare La risoluzione dell'osservazione in campo oscuro è molto più elevata di quella dell'osservazione in campo chiaro, arrivando fino a 0,02-0,004
2, metodo di ispezione dello specchio a contrasto di fase
L'invenzione di successo della microscopia a contrasto di fase nello sviluppo dei microscopi ottici è un risultato importante nella moderna tecnologia della microscopia. Sappiamo che l'occhio umano può distinguere solo la lunghezza d'onda (colore) e l'ampiezza (luminosità) delle onde luminose. Per i campioni biologici incolori e trasparenti, quando la luce li attraversa, la lunghezza d'onda e l'ampiezza non cambiano molto, rendendo difficile l'osservazione del campione in un campo luminoso
Il microscopio a contrasto di fase utilizza la differenza nella lunghezza del percorso ottico dell'oggetto da ispezionare per l'ispezione dello specchio, utilizzando efficacemente il fenomeno dell'interferenza della luce per trasformare la differenza di fase che non può essere distinta dall'occhio umano in una differenza di ampiezza distinguibile. Anche le sostanze incolori e trasparenti possono diventare chiaramente visibili. Ciò facilita notevolmente l'osservazione delle cellule viventi, pertanto la microscopia a contrasto di fase è ampiamente utilizzata nei microscopi invertiti
Il principio di base della microscopia a contrasto di fase è convertire la differenza del percorso ottico della luce visibile che passa attraverso il campione in differenza di ampiezza, migliorando così il contrasto tra le varie strutture e rendendole chiare e visibili. Dopo aver attraversato il campione, la luce subisce una rifrazione, deviando dal percorso ottico originale e ritardata di 1/4 λ (lunghezza d'onda). Se la differenza del percorso ottico viene aumentata o diminuita di un altro 1/4 λ, la differenza del percorso ottico diventa 1/2 λ e l'interferenza tra i due raggi luminosi aumenta o diminuisce dopo che l'asse è stato combinato, migliorando il contrasto. In termini di struttura, i microscopi a contrasto di fase hanno due
differenze speciali rispetto ai normali microscopi ottici:
1. Tra la sorgente luminosa e il condensatore si trova un diaframma anulare e la sua funzione è quella di formare un cono di luce cavo che passa attraverso il condensatore e si concentra sul campione
2. Piastra di fase angolare: alla lente dell'obiettivo viene aggiunta una piastra di fase rivestita con fluoruro di magnesio, che può ritardare la fase della luce diretta o diffratta di 1/4 λ. Può essere diviso in due tipologie:
(1) . Piastra di fase A+: ritarda la luce diretta di 1/4 λ e aggiungi i due set di onde luminose dopo aver combinato gli assi. L'ampiezza aumenta e la struttura del campione diventa più luminosa del mezzo circostante, formando un contrasto luminoso (o contrasto negativo)
(2) . Piastra di fase B+: ritarda la luce diffratta di 1/4 λ e sottrae le onde luminose dopo aver combinato gli assi di due serie di raggi luminosi, determinando una diminuzione dell'ampiezza e formando un contrasto scuro (o contrasto positivo). La struttura diventa più scura del mezzo circostante
