I principi e le caratteristiche strutturali dei microscopi a fluorescenza
Il microscopio a fluorescenza utilizza una sorgente luminosa puntiforme altamente efficiente per emettere una determinata lunghezza d'onda della luce (come la luce ultravioletta 3650 o la luce blu viola 4200) attraverso un sistema di filtri colorati come luce di eccitazione, che eccita le sostanze fluorescenti nel campione per emettere vari colori di fluorescenza, quindi osserva attraverso l'ingrandimento della lente dell'obiettivo e dell'oculare. In questo modo, anche con una fluorescenza debole su uno sfondo forte, è facile da riconoscere e ha un'elevata sensibilità. Viene utilizzato principalmente per lo studio della struttura, della funzione e della composizione chimica delle cellule. La struttura di base di un microscopio a fluorescenza è composta da un normale microscopio ottico e da alcuni accessori come una sorgente luminosa fluorescente, un filtro di eccitazione, un divisore di raggio a doppio colore e un filtro di blocco. La sorgente luminosa fluorescente - utilizza solitamente lampade al mercurio ad altissima-pressione (50-200 W), che possono emettere luce di varie lunghezze d'onda, ma ciascuna sostanza fluorescente ha una lunghezza d'onda della luce di eccitazione che produce la fluorescenza più forte. Pertanto, è necessario aggiungere filtri di eccitazione (solitamente filtri di eccitazione ultravioletti, viola, blu e verdi) per consentire solo a una determinata lunghezza d'onda della luce di eccitazione di passare attraverso e irradiare il campione, assorbendo tutta il resto della luce. Ogni sostanza, dopo essere stata irradiata con luce di eccitazione, emette in un periodo di tempo molto breve una fluorescenza visibile con una lunghezza d'onda maggiore di quella di irradiazione. La fluorescenza ha specificità ed è generalmente più debole della luce di eccitazione. Per osservare la fluorescenza specifica, è necessario aggiungere un filtro bloccante (o soppressore) dietro la lente dell'obiettivo.
Le sue funzioni sono duplici: in primo luogo, assorbire e impedire alla luce di eccitazione di entrare nell'oculare per evitare di disturbare la fluorescenza e danneggiare gli occhi; in secondo luogo, selezionare e consentire il passaggio di una fluorescenza specifica, esibendo un colore fluorescente specifico. È necessario utilizzare due tipi di filtri in combinazione.
