Il corretto utilizzo della microscopia a fluorescenza invertita
Il microscopio a fluorescenza invertito è un microscopio multifunzionale utilizzato nel campo della ricerca scientifica biologica di fascia alta. La sua struttura è complessa e costosa. Pertanto, affinché gli studenti laureati in medicina possano padroneggiare correttamente il funzionamento e gli standard di utilizzo del microscopio a fluorescenza invertito, gli insegnanti devono prima insegnare le conoscenze di base del microscopio a fluorescenza invertito prima di dimostrare il funzionamento effettivo del microscopio a fluorescenza invertito. Dovrebbero introdurre la struttura, il principio, la funzione e i metodi di utilizzo di base del microscopio a fluorescenza invertito, quindi dimostrare diverse funzioni per diversi campioni in operazioni di utilizzo specifiche, rendendo gradualmente standardizzato il funzionamento e l'utilizzo del microscopio a fluorescenza invertito per gli studenti laureati in medicina.
1. Uso corretto dell'osservazione visiva. Una delle funzioni di un microscopio a fluorescenza invertito è quella di osservare in un campo visivo luminoso. Il suo principio di base è quello di ottenere l'imaging su uno sfondo luminoso in base al diverso assorbimento della luce di ciascuna parte del campione dopo essere stato illuminato dalla luce. È adatto principalmente per l'osservazione di cellule colorate o colorate, fette di tessuto e altri campioni.
2. Uso corretto dell'osservazione differenziale. La seconda funzione del microscopio a fluorescenza invertito è l'osservazione della differenza di fase. Il suo principio di base è convertire la differenza del percorso ottico di diverse parti del campione in differenza di ampiezza e osservare attraverso un obiettivo per la differenza di fase con una piastra di fase e un riflettore con un'apertura circolare. È adatto principalmente per l'osservazione di cellule vive o fette di tessuto non colorate. Nel processo di insegnamento sperimentale, oltre a guidare correttamente gli studenti laureati in medicina a seguire i metodi operativi di base dell'osservazione della differenza di fase, è più importante guidarli a comprendere e padroneggiare i campioni utilizzando l'osservazione della differenza di fase. Per loro, il metodo più comunemente utilizzato nella futura ricerca scientifica è l’osservazione microscopica delle cellule in coltura. Innanzitutto, per la scelta dell'attrezzatura cellulare, si consiglia generalmente di utilizzare piastre di coltura, piastre e bottiglie in vetro e materiali plastici. Sono per lo più incolori e trasparenti e possono essere osservati direttamente al microscopio a fluorescenza invertito senza la necessità di versare liquido cellulare o sottoporsi ad altri trattamenti. In secondo luogo, durante l'osservazione al microscopio, non aprire casualmente il coperchio dell'apparecchiatura per evitare di contaminare le cellule. Infine, per gli operatori, è opportuno indossare guanti, mascherine e camici bianchi non solo per tutelare la propria salute ma anche per prevenire la contaminazione cellulare.
3. Uso corretto dell'osservazione in fluorescenza. La terza funzione di un microscopio a fluorescenza invertito è l'osservazione della fluorescenza. Il suo principio di base è quello di utilizzare la luce di eccitazione per eccitare il campione e produrre fluorescenza, ottenendo così l'osservazione della forma e del posizionamento del campione. È adatto principalmente per l'osservazione di campioni marcati con fluorescenza. L'osservazione della fluorescenza è una funzione importante della microscopia a fluorescenza invertita, con accessori costosi e uso speciale. Affinché gli studenti laureati in medicina possano padroneggiare correttamente le norme operative dell'osservazione della fluorescenza, gli insegnanti non solo insegnano loro i metodi operativi di base, ma, cosa più importante, insegnano loro la sua unicità. Innanzitutto, nella preparazione del campione, la superficie del vetrino e del vetro di copertura deve essere liscia e lo spessore deve essere appropriato (il vetrino deve essere compreso tra 0,8 mm e 1,2 mm e il vetro di copertura dovrebbe essere circa {{5 }}.17mm); Il campione deve avere uno spessore adeguato evitando la sovrapposizione delle cellule o il mascheramento delle impurità; L'agente sigillante deve utilizzare una miscela uguale di glicerolo e tampone carbonato (0,5 mol/L pH 9,0-9,5). In secondo luogo, prima dell'osservazione della fluorescenza, le luci nella stanza e la luce bianca del microscopio a fluorescenza invertito dovrebbero essere spente per garantire che si trovino in un ambiente buio. Infine, nell'osservazione della fluorescenza, il tempo di osservazione dovrebbe essere rigorosamente controllato, generalmente 1-2 ore alla volta, altrimenti la fluorescenza decadrà e scomparirà; Quando si regola la sorgente luminosa, è necessario indossare occhiali protettivi per evitare danni UV agli occhiali.
4. Uso corretto della cattura delle immagini. Nella ricerca scientifica, non solo è richiesto che la microscopia a fluorescenza invertita possa ottenere osservazioni multiple, ma anche che la microscopia a fluorescenza invertita possa ottenere l'acquisizione di immagini. Il sistema di microscopio a fluorescenza invertito combina un microscopio ottico con un computer attraverso la conversione fotoelettrica, consentendo non solo l'osservazione microscopica sull'oculare, ma anche l'osservazione, la modifica e l'archiviazione dinamica delle immagini in tempo reale sul computer.
