Punti di forza e limiti dei microscopi a scansione laser multifotone
I vantaggi sono i seguenti:
1. Eccitata dalla luce rossa o infrarossa, la diffusione della luce è piccola (la diffusione di piccole particelle è inversamente proporzionale alla quarta potenza della lunghezza d'onda).
2. Non sono necessari fori stenopeici, in grado di raccogliere più fotoni sparsi dalla sezione trasversale- dell'immagine.
3. I fori stenopeici non sono in grado di distinguere i fotoni sparsi emessi da aree sfocate o focali e i multifotoni hanno un migliore rapporto segnale-rispetto-rumore nell'imaging profondo.
4. La luce ultravioletta o visibile utilizzata per l'eccitazione del singolo fotone viene facilmente assorbita e attenuata dal campione prima che il raggio raggiunga il piano focale, rendendo difficile l'eccitazione degli strati profondi.
5. In termini di osservazione al microscopio biologico, la prima considerazione è non danneggiare lo stato attivo dell'organismo stesso e mantenere la circolazione di acqua, concentrazione di ioni, ossigeno e sostanze nutritive. Nel campo dell'osservazione della luce, sia l'energia termica che quella fotonica devono rimanere entro la dose di irradiazione e l'energia luminosa che non danneggia le cellule.
6. Anche la microscopia multifotone presenta molti vantaggi. In termini di risoluzione tridimensionale, invasione in profondità, efficienza di diffusione, luce di fondo, rapporto segnale-rumore-, controllo, ecc., i microscopi laser hanno caratteristiche ineguagliabili o superiori che i microscopi laser precedenti non possedevano.
Il microscopio confocale a scansione laser multifotone è stato esteso a vari campi di ricerca e applicazione Può eseguire osservazioni tridimensionali non-distruttive su campioni nel loro stato naturale e migliorare la risoluzione e il rapporto segnale-rispetto-rumore del sistema. Utilizzando i cambiamenti nelle proprietà del materiale dopo l'eccitazione multifotone, è possibile ottenere anche la memorizzazione dei dati di altezza tridimensionale e la microfabbricazione tridimensionale in qualsiasi direzione, con un elevato valore applicativo Si può ritenere che con l'ulteriore sviluppo delle tecnologie meccaniche, dei materiali e laser relative alla microscopia confocale multifotone, la microscopia confocale a scansione laser multifotone avrà un maggiore sviluppo e applicazioni più ampie
Gli svantaggi sono i seguenti:
1. Solo per imaging in fluorescenza.
2. Se il campione include cromofori in grado di assorbire la luce di eccitazione, come i pigmenti, il campione potrebbe essere soggetto a danni termici.
3. La risoluzione è leggermente ridotta, sebbene possa essere migliorata utilizzando contemporaneamente piccoli fori confocali, si verificherà una perdita di segnale.
4. A causa delle limitazioni dei costosi laser ultraveloci, il costo dei microscopi a scansione multifotone è relativamente elevato.
