Preparazione e osservazione di campioni biologici per microscopi elettronici
La risoluzione di un microscopio dipende dalla lunghezza d'onda della luce utilizzata. Il microscopio elettronico, introdotto nel 1933, raggiunse una risoluzione significativamente più elevata di un microscopio ottico grazie all'uso di fasci di elettroni con lunghezze d'onda molto più corte della luce visibile come sorgenti luminose. Le diverse sorgenti luminose determinano anche una serie di differenze tra microscopi elettronici e microscopi ottici.
Sulla base delle differenze nei principi dell'imaging del fascio di elettroni e nel modo in cui agiscono sui campioni, i moderni microscopi elettronici si sono sviluppati in molti tipi. Attualmente, i più comunemente utilizzati sono i microscopi elettronici a trasmissione e i microscopi elettronici a scansione. Il primo ha un ingrandimento totale che può variare tra 1000-10000000 volte, mentre il secondo ha un ingrandimento totale che può variare tra 20-300000 volte. Questo esperimento introduce principalmente la preparazione di due tipi di campioni microscopici, la microscopia elettronica a trasmissione e la microscopia elettronica a scansione.
2, Attrezzatura
1. Il ceppo Escherichia coli è inclinato.
2. Soluzione o reagente: pentile acetato, acido solforico concentrato, etanolo anidro, acqua sterile, soluzione acquosa di fosfotungstato di sodio al 2% (pH 6,5-8,0), soluzione di polivinil formaldeide allo 0,3% (disciolta in cloroformio), citocromo c, acetato di ammonio, plasmide pBR322.
3. Gli strumenti o altri strumenti includono normali microscopi ottici, reti di rame, imbuti di porcellana, bicchieri, capsule di Petri, contagocce sterili, pinzette sterili, spilli, vetrini, piastre di conteggio, macchine per rivestimento sottovuoto, essiccatori per punti critici, ecc.
3, fasi operative
(1) Preparazione e osservazione di campioni per la microscopia elettronica a trasmissione
1. Trattamento della rete metallica
Il campione di un microscopio ottico viene posto su un vetrino per l'osservazione. Tuttavia, in uno specchio di trasmissione, poiché gli elettroni non possono penetrare nella lastra di vetro, un materiale a rete può essere utilizzato solo come supporto, comunemente indicato come rete portante. La rete portante può essere suddivisa in varie specifiche a causa dei diversi materiali e forme, tra cui viene comunemente utilizzata la rete di rame con 200-400 mesh (numero di fori). La rete di rame deve essere trattata prima dell'uso per rimuovere lo sporco e mantenerla pulita, altrimenti ciò influenzerà la qualità della pellicola di supporto e la chiarezza delle foto dei campioni. La rete di rame da 400 mesh utilizzata in questo esperimento può essere trattata con il seguente metodo: prima immergere e far galleggiare con acetato di pentile per alcune ore, quindi risciacquare più volte con acqua distillata e infine immergere e far galleggiare la rete di rame in etanolo anidro per la disidratazione. Se la rete di rame non è ancora pulita dopo i metodi sopra indicati, può essere immersa in acido solforico concentrato diluito (1:1) per 1-2 minuti o bollita in una soluzione di NaOH all'1% per alcuni minuti, sciacquata più volte con acqua distillata e quindi disidratata in etanolo anidro per un uso successivo.
