Requisiti di spessore del microscopio ottico per vetrini
Disidratazione microscopica e fissaggio del campione: a causa della centrifugazione ripetuta, le cellule vengono perse, quindi è meglio attaccare le cellule alla superficie di un vetrino o di un foglio di plastica per la microscopia ottica, in modo che le cellule siano disidratate e asciugate insieme al vetro scivolo o foglio di plastica. Requisiti per lo spessore dei vetrini nella microscopia ottica Per consentire alle cellule di attaccarsi ai vetrini o ai fogli di plastica, è necessario prima stendere uno strato di pellicola sui vetrini o sui fogli di plastica. Il metodo di posa del film è il seguente:
(1) Il metodo più semplice per la microscopia ottica consiste nell'applicare un sottile strato di pellicola polivinilica formale (formvar). Immergere i vetrini puliti in (0.5-1) percento di soluzione di cloroformio polivinilico formale. Dopo che l'atmosfera si è volatilizzata, sulle diapositive appare una pellicola bianca. Agitare più volte i vetrini nel cloroformio per far cambiare la pellicola. Sottile e pronto all'uso.
(2) Far cadere 0.1 latitudine di poli-L-lisina (sciogliere 1 mg di poli-lisina in 1 ml di acqua filtrata durante la preparazione) sul vetrino pulito e metterlo in una scatola di alimentazione a 450°C dopo che la gocciolina si è dispiegata . Asciutto. Questo metodo è il migliore perché la poli-L-lisina è caricata positivamente, consentendo l'adesione di più cellule caricate negativamente sulla superficie.
(3) Aggiungere plasma e glicerolo all'acqua distillata nel rapporto di (30--40) percento e (3-5) percento in base ai requisiti del microscopio ottico per lo spessore del vetrino per formare una proteina di glicerolo soluzione. Il liquido viene fatto cadere sul vetrino pulito, aperto e asciugato al microscopio ottico. Il film proteico steso viene immerso nel 2% di glutaraldeide per fissare la proteina, lavato e asciugato per un uso successivo. Prima dell'uso, il plasma viene fatto cadere sul film proteico Renderlo "attivato", risciacquare con tampone dopo 30 minuti e può essere applicato direttamente.
Le cellule fissate e pulite vengono trasformate in un'adeguata concentrazione di sospensione cellulare con acqua filtrata sotto un microscopio digitale e il microscopio ottico viene posto su un vetrino o un foglio di plastica che è stato coperto con una membrana e posto in un ambiente umido, basso temperatura (40C) ambiente (30-120) minuti per consentire alle cellule di attaccarsi alla membrana. Utilizzare pinzette sottili per raccogliere il vetrino e scuoterlo in acqua bidistillata pulita e lavare via le cellule non attaccate con un microscopio ottico. Requisiti per lo spessore dei vetrini nei microscopi ottici I microscopi polarizzatori vengono quindi rapidamente collocati in un recipiente riempito con il 50% di acetone (o etanolo). Il processo di disidratazione consiste nel mettere i vetrini in acetone o etanolo con concentrazione crescente ogni 3 minuti e il microscopio ottico o aumentare continuamente la concentrazione dell'agente disidratante nel contenitore del vetrino. Secondo l'esperienza di laboratorio dell'autore, quest'ultima operazione è più conveniente. Il metodo specifico di microscopia ottica può aspirare metà dell'agente disidratante nel contenitore ogni 3 minuti, quindi aggiungere una quantità uguale di agente disidratante con una concentrazione del 100%. Dopo 5-6 operazioni, la concentrazione dell'agente disidratante nel recipiente del prezzo del microscopio supera lo 0,5% e le cellule vengono disidratate con successo. Dopo l'asciugatura del punto critico, il vetrino o il foglio di plastica viene incollato al molo del campione con adesivo conduttivo per il rivestimento metallico. Ci sono anche comodità per attaccare le cellule alle membrane stabilite dal terzo metodo. Il microscopio ottico può appendere le cellule fissate dalla bassa concentrazione di glutaraldeide sul film proteico "attivato". Il microscopio ottico richiede che lo spessore del vetrino venga posizionato per 10 minuti e il vetrino o il foglio di plastica viene immerso nel 2% di glutaraldeide. Dopo 30 minuti, risciacquare con acqua bidistillata filtrata, quindi disidratare, asciugare e ricoprire di metallo secondo il metodo sopra descritto.
