Note e consigli sull'utilizzo di diversi microscopi a contrasto di fase
1) Installare il dispositivo di contrasto di fase: rimuovere la lente del condensatore del microscopio ordinario e installare la lente del condensatore con un diaframma anulare su un microscopio corrispondente; rimuovere la normale lente dell'obiettivo del microscopio e sostituirla con una lente dell'obiettivo con una piastra di fase; sostituire l'oculare con oculari focalizzatori per microscopi a contrasto di fase; appositi filtri verdi (a volte non necessari) sono posti all'ingresso della luce della sorgente luminosa.
2) Allineamento e messa a fuoco della luce: regolare l'oculare di messa a fuoco e la vite di regolazione dello spessore fino a quando un cerchio bianco e un cerchio nero possono essere visti chiaramente nel campo visivo. Il cerchio nero è fisso e il cerchio bianco può essere spostato regolando la vite sul dispositivo del condensatore, in modo che il cerchio nero e il cerchio bianco coincidano completamente. Togliere l'oculare di messa a fuoco e sostituirlo con l'oculare originale del microscopio per controllare.
Analisi dei problemi nell'uso del microscopio a contrasto di fase
1. L'influenza dello spessore del campione Quando si esegue l'osservazione in contrasto di fase, lo spessore del campione dovrebbe essere di 5 μm o più sottile. Quando si utilizza un campione più spesso, lo strato superiore del campione è molto chiaro, ma lo strato profondo sarà sfocato e causerà interferenze di sfasamento. e diffusione della luce.
2. L'influenza del vetro di copertura e del vetrino Il campione deve essere coperto con un vetro di copertura, altrimenti l'anello luminoso del diaframma anulare e l'anello scuro del piatto di fase sono difficilmente sovrapponibili. L'osservazione del contrasto di fase ha anche requisiti elevati sulla qualità del vetro del vetrino scorrevole e del vetro di copertura. Quando sono presenti graffi, spessore irregolare o irregolarità, si verificheranno distorsione dell'anello luminoso e interferenza di fase. Inoltre, quando il vetrino è troppo spesso o troppo sottile, l'anello luminoso del diaframma anulare diventerà più grande o più piccolo.
3. Effetto alone e dissolvenza Nel processo di imaging del microscopio a contrasto di fase, quando una struttura diventa scura a causa del ritardo di fase, non è la perdita di luce, ma il risultato della ridistribuzione della luce sul piano dell'immagine. Quindi la luce apparentemente persa nelle aree scure apparirà come un alone luminoso attorno agli oggetti più scuri. Questo è uno svantaggio della microscopia a contrasto di fase, che ostacola l'osservazione di strutture fini, e il fenomeno dell'alone è più grave quando il diaframma anulare è molto stretto. Un altro fenomeno nella microscopia a contrasto di fase è l'effetto di ombreggiatura, che si riferisce alla perdita di contrasto ai bordi di un'area più ampia con lo stesso ritardo di fase quando osservato dal contrasto di fase.
4. Inversione di fase Quando n'n, il contrasto chiaro e scuro dell'immagine è esattamente opposto, che si chiama inversione di fase. È irriconoscibile quando la differenza di fase δ=0, e il contrasto aumenta con l'aumento di δ, e l'inversione di fase apparirà quando δ continua ad aumentare fino a un certo valore. Quando si utilizza una lente dell'obiettivo con valore di assorbanza elevato del 90 percento (alto contrasto), questo valore di trasformazione è di circa 0.55λ e quando si utilizza una lente dell'obiettivo con valore di assorbanza standard del 70 percento, è di circa 0,33λ . Gli obiettivi con valori di assorbanza più elevati devono essere utilizzati per risolvere differenze di percorso ottico minori.
