Misurazione del volume del blocco tissutale mediante microscopi biologici
Finora, la criofissazione, il sezionamento ultrasottile-congelato e la liofilizzazione-sono metodi di routine per la microscopia a raggi X-di tessuti e cellule. Si prega di fornire i seguenti dettagli relativi a questo metodo:
Un microscopio biologico con riflettore può spostare il riflettore su e giù per ottenere una luminosità moderata e anche l'apertura dell'apertura variabile può essere modificata per ottenere una luminosità moderata. Se la luce proviene dal sole, il faretto può essere alzato opportunamente e l'apertura della luce variabile può essere ampliata opportunamente. Se la luce è troppo forte è possibile abbassare opportunamente il faretto e ridurre opportunamente l'apertura dell'intersezione. Se in questa situazione ti senti ancora abbagliante, puoi scegliere di posizionare un filtro appropriato sulla staffa sotto i riflettori. Questa quercia può raggiungere una luminosità che ti soddisfa. Naturalmente, regolando le posizioni superiore e inferiore del faretto è possibile modificare la dimensione dell'apertura di lettura della luce e selezionare filtri adatti, il che richiede un certo periodo di pratica ed esperienza.
Una questione molto importante nella microscopia biologica è il processo di campionamento e isolamento delle cellule. Dopo la liofilizzazione-e l'inclusione in resina (FD), le sezioni ultrasottili-congelate devono essere lavorate con attenzione per garantire che il contenuto di 65 elementi di ciascuna parte non venga danneggiato durante l'osservazione e l'analisi. A causa dei numerosi passaggi e dei costi elevati coinvolti nella microanalisi a raggi X, è deplorevole trarre conclusioni errate se le cellule analizzate sono danneggiate o morte dopo un'elaborazione prolungata e multi-fase. Le cellule del miocardio separate dal trattamento con gelatinasi hanno due forme, una è a forma di bastoncino lungo e l'altra è circolare. Quest'ultimo si riferisce alle cellule morenti che vengono danneggiate durante il processo di separazione cellulare.
Il contenuto e la distribuzione degli elettroliti in questi due tipi di cellule sono molto diversi al microscopio biologico. Il Na è molto elevato e il K è estremamente basso nei cardiomiociti circolari, mentre la concentrazione di Ca nei dendriti lineari è molto elevata. Dopo la verifica con altri metodi analitici, è stato dimostrato che l'alto Na e il basso K nelle cellule circolari e l'alto Ca nei mitocondri sono il risultato di un danno alla membrana durante la separazione cellulare. Il metodo di fissazione a freddo per cellule e tessuti spesso comporta prima il raffreddamento e poi la loro conservazione in azoto liquido. La fissazione dell'estinzione è cruciale per l'effetto di conservazione. Le cellule viventi o i tessuti freschi sono ricchi di acqua e, una volta spente, le parti delle cellule o dei tessuti che entrano in contatto diretto con il refrigerante (specialmente quando si utilizza l'azoto liquido per il raffreddamento) vengono spesso congelate e fissate prima, formando un "guscio" che impedisce alla parte centrale delle cellule di essere schiacciata e fissata. Pertanto, quando si esegue la microanalisi a raggi X, si scopre spesso che nella parte centrale delle cellule più grandi sono presenti cristalli di ghiaccio. Per evitare che questa situazione si verifichi, come refrigerante viene utilizzata una sostanza con un punto di fusione superiore all'azoto liquido ma inferiore di 806c. Esistono molte di queste sostanze, ma sono facili da ottenere e la più economica è il propano concentrato (punto di ebollizione 42,120c, punto di fusione 187,10c, peso molecolare 44,1), che ha anche una rapida velocità di raffreddamento. Ma il suo svantaggio è che è infiammabile.
