Principali componenti e funzioni della microscopia laser confocale
1. Foro stenopeico di illuminazione
Funzione: far passare il laser attraverso il foro stenopeico di illuminazione per formare una sorgente luminosa puntiforme, che presenta vantaggi unici come forte direzionalità, piccola divergenza, elevata luminosità, elevata coerenza spaziale e temporale ed eccitazione di polarizzazione planare. E forma un dispositivo confocale con il foro stenopeico del rilevatore e il piano focale.
2. Divisore del raggio
Funzione: separare la fluorescenza di eccitazione del campione da altre luci non segnaletiche.
3. Lente dell'obiettivo
4. Piano focale
Funzione: la sorgente luminosa puntiforme del laser si concentra sull'oggetto sul piano focale, eccitando il campione etichettato in modo fluorescente affinché emetta fluorescenza e formi una macchia focale. Il punto luminoso viene elaborato da una serie di dispositivi come una lente obiettiva e un divisore di raggio e focalizzato in due posizioni: il foro stenopeico dell'illuminazione e il foro stenopeico del rilevatore. Da qui il significato di confocale.
5. Foro stenopeico del rilevatore
Funzione: Funziona come un filtro spaziale* Per massimizzare l'ostruzione della luce diffusa sul piano non focalizzato e della luce diffusa all'esterno del punto non focale sul piano focalizzato, al fine di garantire che tutti i segnali di fluorescenza ricevuti dal foro stenopeico del rilevatore provengano dalla posizione focale di il punto campione. Pertanto, il punto focalizzato sulla diffrazione sul campione e il punto di imaging del foro stenopeico del rivelatore contengono le stesse informazioni (coniugato a due punti).
6. Tubo fotomoltiplicatore (rivelatore)
Funzione: riceve segnali luminosi attraverso fori stenopeici, li converte in segnali elettrici e li trasmette al computer, ottenendo un'immagine chiara dell'intero piano focale sullo schermo.
7. Laser: lo sviluppo della tecnologia della microscopia confocale non può essere separato dal rapido sviluppo dei laser. Possiamo scegliere diversi laser in base alle nostre esigenze di ricerca. Come ArUV (351,364 nm), HeCd (442 nm), AR (457488514 nm), ArKr (488568647 nm), Kr (568 nm), HeNe (543 nm), HeNe (633 nm), ecc.
8. Canali di fluorescenza multipli: avere più canali di fluorescenza per ottenere più etichettature di campioni contemporaneamente.
