Introduzione ai vantaggi e agli svantaggi del microscopio a scansione laser multifotone
Vantaggi della microscopia a scansione laser multifotone:
1. Eccitato dalla luce rossa o dalla luce infrarossa, la diffusione della luce è piccola e la diffusione di piccole particelle è inversamente proporzionale alla quarta potenza della lunghezza d'onda.
2. È possibile raccogliere più fotoni sparsi dalla sezione di imaging senza fori stenopeici.
3. Il foro stenopeico non è in grado di distinguere i fotoni diffusi emessi dall'area fuori fuoco o dall'area di messa a fuoco e il rapporto segnale-rumore dell'imaging multi-fotone negli strati profondi è buono.
4. La luce ultravioletta o visibile utilizzata per l'eccitazione del singolo fotone viene facilmente assorbita e attenuata dal campione prima che il raggio raggiunga il piano focale e non è facile eccitare gli strati profondi.
5. In termini di osservazione al microscopio biologico, la prima considerazione è non danneggiare lo stato attivo dell'organismo stesso e mantenere la circolazione dell'acqua, la concentrazione di ioni, l'ossigeno e le sostanze nutritive. Nel caso dell'osservazione della luce, sia il calore che l'energia dei fotoni devono rimanere entro la quantità di irradiazione e l'energia luminosa che non danneggeranno le cellule.
6. La microscopia multifotone presenta molti vantaggi. Come la risoluzione tridimensionale, la penetrazione profonda, l'efficienza di diffusione, la luce di fondo, il rapporto segnale-rumore, il controllo, ecc., hanno tutte caratteristiche che i precedenti microscopi laser non avevano o non potevano superare.
Svantaggi della microscopia a scansione laser multifotone:
1. Solo per imaging in fluorescenza.
2. Se il campione include cromofori che assorbono la luce di eccitazione, il campione potrebbe essere danneggiato termicamente.
3. La risoluzione è leggermente ridotta. Sebbene possa essere migliorato utilizzando contemporaneamente l'apertura confocale, il segnale viene perso.
4. A causa delle limitazioni dei costosi laser ultraveloci, il costo del microscopio a scansione multifotone è relativamente elevato.
