Vantaggi migliorati del microscopio multifotone a scansione laser
Il microscopio multifotone a scansione laser è un importante miglioramento del microscopio ottico, che mostra principalmente che può osservare la struttura profonda delle cellule viventi, delle cellule fisse e dei tessuti e può ottenere una struttura del piano Z multistrato chiara e nitida, ovvero fette ottiche , che può essere utilizzato per costruire la struttura solida tridimensionale dei campioni. Il microscopio confocale utilizza una sorgente di luce laser, che riempie l'intero piano focale posteriore della lente dell'obiettivo dopo l'espansione, quindi passa attraverso il sistema di lenti della lente dell'obiettivo per convergere in punti molto piccoli sul piano focale del campione. Secondo l'apertura numerica della lente dell'obiettivo, il diametro del punto di illuminazione più luminoso è di circa 0,25 ~ 0,8μm e la profondità è di circa 0,5 ~ 1,5 μm .. La dimensione del fuoco di copolimerizzazione dipende dal design del microscopio, dalla lunghezza d'onda del laser, dalle caratteristiche della lente dell'obiettivo, dall'impostazione dello stato dell'unità di scansione e dalle proprietà del campione. Il campo di illuminazione e la profondità di campo del microscopio sono molto ampi, mentre l'illuminazione del microscopio confocale è concentrata su un fuoco sul piano focale. Il vantaggio più fondamentale del microscopio confocale è che può creare sottili fette ottiche di campioni fluorescenti spessi (che possono raggiungere 50 μm o più) e lo spessore delle fette è compreso tra circa 0,5 e 1,5 μm. È possibile ottenere una serie di immagini ottiche di sezioni spostando il campione su e giù tramite il motore passo-passo dell'asse Z del microscopio. L'acquisizione delle informazioni sull'immagine è controllata nel primo piano e non sarà disturbata da segnali provenienti da altre posizioni sul campione. Dopo aver rimosso l'influenza della fluorescenza di fondo e aumentato il rapporto segnale-rumore, il contrasto e la risoluzione dell'immagine confocale sono ovviamente migliorati rispetto all'immagine fluorescente con illuminazione di campo tradizionale. In molti esemplari, molti intricati componenti strutturali sono intrecciati per formare un sistema complesso, ma una volta raccolte abbastanza sezioni ottiche, possiamo ricostruirle in tre dimensioni tramite software. Questo metodo sperimentale è stato ampiamente utilizzato nella ricerca biologica per chiarire la complessa relazione strutturale e funzionale tra cellule o tessuti.
