Come scegliere tra un microscopio invertito e un microscopio a fluorescenza?
Nella coltura cellulare e nei relativi esperimenti derivati, il microscopio è uno strumento molto importante. Attualmente esistono sul mercato vari tipi di microscopi. È una sfida scegliere un microscopio che soddisfi le esigenze e sia applicabile. Quella che segue è un'introduzione ai principi dei microscopi invertiti e dei microscopi a fluorescenza, in modo che tu possa scegliere facilmente.
La composizione del microscopio invertito è la stessa di quella del microscopio ordinario, comprendente principalmente tre parti: la parte meccanica, la parte illuminante e la parte ottica. La composizione del microscopio invertito è la stessa di quella del normale microscopio verticale, tranne per il fatto che la lente dell'obiettivo e il sistema di illuminazione sono invertiti, il primo è sotto il tavolino e il secondo è sopra il tavolino. Una tale struttura può espandere in modo significativo la distanza effettiva tra il sistema di concentrazione dell'illuminazione e il palco, che è conveniente per posizionare oggetti più spessi da osservare, come piatti di coltura e bottiglie di coltura cellulare (ovviamente sono disponibili anche vetrini, ecc.) , e allo stesso tempo, la distanza tra la lente dell'obiettivo e il materiale. La distanza di lavoro tra loro non deve essere molto grande. I microscopi invertiti sono utilizzati per l'osservazione di microrganismi, cellule, batteri, colture di tessuti, sospensioni, sedimenti, ecc. in unità mediche e sanitarie, istituti di istruzione superiore e istituti di ricerca. Può osservare continuamente il processo di riproduzione e divisione di cellule, batteri, ecc. nel mezzo di coltura e può scattare foto di qualsiasi forma durante il processo. È ampiamente utilizzato in citologia, parassitologia, oncologia, immunologia, ingegneria genetica, microbiologia industriale, botanica e altri campi.
La microscopia a fluorescenza viene utilizzata per studiare l'assorbimento e il trasporto di sostanze nelle cellule, la distribuzione e la localizzazione di sostanze chimiche, ecc. Per l'oggetto in esame, ci sono due modi per generare fluorescenza: autofluorescenza, che emette fluorescenza direttamente dopo essere stata irradiata con raggi ultravioletti leggero; Alcune sostanze nelle cellule, come la clorofilla, producono autofluorescenza dopo essere state irradiate dai raggi ultravioletti; sebbene alcune sostanze stesse non possano emettere fluorescenza, possono anche emettere fluorescenza secondaria dopo essere state colorate con coloranti fluorescenti o anticorpi fluorescenti dopo essere state irradiate dai raggi ultravioletti. Il microscopio a fluorescenza utilizza una sorgente di luce puntiforme ad alta efficienza luminosa per emettere luce di una certa lunghezza d'onda (luce ultravioletta 365 nm o luce blu viola 420 nm) attraverso il sistema di filtri come luce di eccitazione, e dopo aver eccitato le sostanze fluorescenti nel campione per emettere fluorescenza di vari colori, quindi l'osservazione viene eseguita attraverso l'ingrandimento della lente dell'obiettivo e dell'oculare. In questo modo, sotto uno sfondo a forte contrasto, anche se la fluorescenza è molto debole, è facile da identificare e ha un'elevata sensibilità. Viene utilizzato principalmente per la ricerca della struttura e della funzione delle cellule e della composizione chimica.
I microscopi a fluorescenza si dividono in tipo a trasmissione e tipo ad epi-espulsione, il primo è più primitivo e il secondo è più avanzato. La struttura di base dei due tipi di microscopi a fluorescenza è simile, la differenza principale è: la luce di eccitazione del tipo di trasmissione passa attraverso il campione e l'intero campione genera fluorescenza, che poi entra nella lente dell'obiettivo. Maggiore è l'ingrandimento, più debole è la fluorescenza; la luce di eccitazione del tipo epi-emissione viene proiettata sulla superficie del campione, la superficie del campione produce fluorescenza e la fluorescenza entra nuovamente nella lente dell'obiettivo. Maggiore è l'ingrandimento, più forte è la fluorescenza, adatta per l'osservazione ad alto ingrandimento. I componenti principali del microscopio a fluorescenza includono una sorgente luminosa con lampada al mercurio, una piastra filtrante di eccitazione, uno specchio dicroico (tipo episodio), una piastra filtrante pressata e un condensatore di campo oscuro (tipo di trasmissione), ecc. Inoltre, a causa del grave generazione di calore delle lampade al mercurio, la maggior parte di esse è inoltre dotata di filtri che assorbono il calore. Alcuni microscopi a fluorescenza hanno anche obiettivi a contrasto di fase e diaframmi anulari, quindi sono possibili osservazioni a contrasto di fase. Esistono anche microscopi fluorescenti che adottano una struttura invertita, un altro microscopio invertito e così via.
Inoltre, i microscopi sopra menzionati possono essere assemblati in un microscopio digitale installando un CCD, che converte l'immagine fisica vista dal microscopio in un'immagine su un computer attraverso la conversione da digitale ad analogico. Pertanto, possiamo cambiare la ricerca sul campo microscopico dalla tradizionale osservazione binoculare ordinaria alla riproduzione sul display, migliorando così l'efficienza del lavoro.
