Come regolare l'intensità del laser di un microscopio confocale a scansione laser
Esistono due fattori di regolazione per l'intensità del laser: manopola di controllo della potenza e filtro sintonizzabile acusto-ottico (AOTF)
1. Manopola di controllo della potenza: generalmente impostata al 30% del valore massimo. Aumentando l'uscita si ridurrà la durata del laser e si genererà rumore laser. AOTF, PMT, ecc. devono essere regolati per primi per ottenere l'intensità migliore.
2. Filtro sintonizzabile acusto-ottico: controlla il raggio luminoso di eccitazione e l'intensità e può accendere o spegnere il laser o regolarlo tra 0 e 100% in millisecondi. Ciò consente l'utilizzo di raggi laser diversi per ciascun punto dell'immagine e la selezione dell'intensità richiesta.
Principio di funzionamento: utilizza l'effetto di diffrazione di Bragg delle onde sonore che si propagano in vari mezzi sulla diffrazione di Bragg incidente nel mezzo di propagazione. Quando viene immessa una determinata frequenza del segnale RF, AOTF diffrange la luce policromatica incidente e seleziona la luce monocromatica con la lunghezza d'onda dell'ingresso. La lunghezza d'onda della luce monocromatica corrisponde-a-uno con la frequenza RF f. Finché il segnale elettrico è sintonizzato, la lunghezza d'onda di uscita può essere modificata rapidamente e in modo casuale. AOTF raggiunge la regolazione continua dell'intensità del laser e ha una funzione di regolazione rapida, realizzando stimolazione e scansione locale, commutazione rapida della lunghezza d'onda (livello di microsecondi). Nella microscopia confocale laser, i tubi fotomoltiplicatori non possono aumentare l'intensità del laser, ma possono regolare l'intensità della luce post-imaging. Pertanto, regolando la tensione del tubo fotomoltiplicatore, è possibile regolare la luminosità dell'immagine. Inoltre, la dimensione del foro stenopeico focale influisce sulla quantità di fotoni e può anche regolare la luminosità dell'immagine. Un tubo fotomoltiplicatore è uno speciale tubo a vuoto estremamente sensibile alla luce ultravioletta, visibile e al vicino{10}}infrarosso. Può migliorare il segnale luminoso debole in entrata di 108 volte, consentendo la misurazione del segnale luminoso.
