Come regolare l'intensità del laser di un microscopio confocale a scansione laser
① Manopola di controllo della potenza: generalmente impostata al 30% del valore massimo. Una potenza maggiore riduce la durata del laser e introduce rumore laser. Ottimizza l'intensità regolando prima AOTF, PMT e altri componenti.
② Filtro sintonizzabile acusto-ottico (AOTF): controlla il raggio luminoso di eccitazione e l'intensità. Può accendere o spegnere il laser in pochi millisecondi o regolare l'intensità del laser in modo continuo dallo 0 al 100%. Ciò consente di applicare raggi laser diversi e valori di intensità selezionati a ciascun pixel dell'immagine.
Principio di funzionamento: si basa sulla diffrazione di Bragg della luce incidente indotta dalle onde acustiche che si propagano nel mezzo. Quando viene immesso un segnale RF di una frequenza specifica, l'AOTF diffrange la luce policromatica incidente e seleziona la luce monocromatica di lunghezza d'onda λ. Esiste una corrispondenza biunivoca tra la lunghezza d'onda della luce monocromatica selezionata e la radiofrequenza f. La lunghezza d'onda di uscita può essere modificata rapidamente e in modo casuale semplicemente sintonizzando il segnale elettrico. L'AOTF consente la regolazione continua dell'intensità del laser con una risposta rapida per la stimolazione locale, la scansione e la commutazione rapida della lunghezza d'onda a livello di microsecondi.
In un microscopio confocale a scansione laser, il tubo fotomoltiplicatore (PMT) non può aumentare l'intensità del laser, ma regola l'intensità del segnale fotoelettrico per l'immagine finale. Pertanto, regolando la tensione del tubo fotomoltiplicatore si modifica la luminosità dell'immagine. Inoltre, la dimensione del foro stenopeico confocale influisce sul conteggio dei fotoni e può essere utilizzata anche per regolare la luminosità dell'immagine. Il tubo fotomoltiplicatore è uno speciale tubo a vuoto estremamente sensibile alla luce ultravioletta, visibile e al vicino infrarosso. Amplifica i segnali ottici deboli in ingresso fino a 10⁸ volte in modo che i segnali luminosi possano essere misurati.
