In che modo la microscopia a fluorescenza differisce dalla microscopia laser confocale
Microscopio a fluorescenza
1. Un microscopio a fluorescenza utilizza la luce ultravioletta come sorgente luminosa per illuminare l'oggetto da ispezionare per fargli emettere fluorescenza, quindi osservare la forma e la posizione dell'oggetto al microscopio. La microscopia a fluorescenza viene utilizzata per studiare l'assorbimento e il trasporto di sostanze all'interno delle cellule, nonché la distribuzione e il posizionamento delle sostanze chimiche. Alcune sostanze presenti nelle cellule, come la clorofilla, possono emettere fluorescenza dopo essere state irradiate dai raggi ultravioletti; alcune sostanze di per sé non possono emettere fluorescenza, ma se sono colorate con coloranti fluorescenti o anticorpi fluorescenti, possono emettere fluorescenza dopo l'irradiazione con raggi ultravioletti. La microscopia a fluorescenza è uno degli strumenti per la ricerca qualitativa e quantitativa su tali sostanze.
2. Principio del microscopio a fluorescenza:
(A) Sorgente luminosa: la sorgente luminosa irradia luce di varie lunghezze d'onda (dall'ultravioletto all'infrarosso).
(B) Sorgente luminosa del filtro di eccitazione: trasmette la luce di una lunghezza d'onda specifica che può causare la fluorescenza del campione, bloccando al contempo la luce inutile per stimolare la fluorescenza.
(C) Campioni fluorescenti: generalmente colorati con pigmenti fluorescenti.
(D) Filtro di blocco: blocca la luce di eccitazione che non viene assorbita dal campione e trasmette selettivamente la fluorescenza. Anche alcune lunghezze d'onda della fluorescenza vengono trasmesse selettivamente. Un microscopio che utilizza la luce ultravioletta come sorgente luminosa per rendere fluorescente l'oggetto illuminato. Il microscopio elettronico fu assemblato per la prima volta nel 1931 a Berlino, in Germania, da Knorr e Hallowska. Questo microscopio utilizza un fascio di elettroni ad alta velocità invece di un raggio di luce. Poiché la lunghezza d'onda del flusso di elettroni è molto più corta di quella della luce, l'ingrandimento del microscopio elettronico può raggiungere 800,000 volte e il limite minimo di risoluzione è 0,2 nanometri. Il microscopio elettronico a scansione, iniziato ad essere utilizzato nel 1963, consente alle persone di vedere le minuscole strutture sulla superficie degli oggetti.
3. Ambito di applicazione: utilizzato per ingrandire le immagini di piccoli oggetti. Generalmente utilizzato nell'osservazione di biologia, medicina, particelle microscopiche, ecc.
microscopio confocale
1. Il microscopio confocale aggiunge una semilente semiriflettente al percorso ottico della luce riflessa, che rifrange la luce riflessa che è passata attraverso la lente in altre direzioni. C'è un deflettore con un foro stenopeico al centro, e il foro stenopeico è situato. Nel punto focale, dietro il deflettore, c'è un tubo fotomoltiplicatore. Si può immaginare che la luce riflessa prima e dopo il fuoco della luce di rilevamento passi attraverso questo sistema confocale e non possa essere focalizzata sul piccolo foro e venga bloccata dal deflettore. Quindi ciò che misura il fotometro è l'intensità della luce riflessa nel fuoco.
2. Principio: i microscopi ottici tradizionali utilizzano sorgenti luminose di campo e l'immagine di ciascun punto sul campione sarà disturbata dalla diffrazione o dalla luce diffusa dai punti adiacenti; I microscopi confocali a scansione laser utilizzano raggi laser per formare sorgenti luminose puntiformi attraverso fori stenopeici illuminanti per illuminare l'interno del campione. Ogni punto del piano focale viene scansionato e il punto illuminato sul campione viene ripreso nel foro stenopeico di rilevamento, che viene ricevuto punto per punto o linea per linea dal tubo fotomoltiplicatore (PMT) o dal dispositivo di accoppiamento a freddo (cCCD) dietro il rilevamento stenopeico e si forma rapidamente un'immagine fluorescente sullo schermo del monitor del computer. Il foro stenopeico di illuminazione e quello di rilevamento sono coniugati rispetto al piano focale dell'obiettivo. I punti del piano focale vengono focalizzati contemporaneamente sul foro stenopeico di illuminazione e su quello stenopeico di emissione. I punti esterni al piano focale non verranno ripresi dal foro stenopeico di rilevamento. Ciò si ottiene Le immagini confocali sono sezioni trasversali ottiche di campioni, che superano i difetti delle immagini sfocate nei normali microscopi.
3. Campi di applicazione: medicina, ricerca scientifica su animali e piante, biochimica, batteriologia, biologia cellulare, embriologia dei tessuti, scienze alimentari, genetica, farmacologia, fisiologia, ottica, patologia, botanica, neuroscienze, biologia marina e scienza dei materiali, scienza elettronica , meccanica, geologia del petrolio, mineralogia.
