Funzioni di ciascun filtro in un microscopio a fluorescenza
Il problema più critico con la microscopia a fluorescenza è la combinazione di filtri ottici. Sia il filtro di eccitazione che il filtro di schermatura devono essere adatti al materiale fluorescente osservato e abbinati tra loro. Per alcune applicazioni specifiche, eventuali errori nella selezione dei filtri possono portare a malintesi e persino a risultati errati. I risultati della tecnologia della microscopia a fluorescenza sono inseparabili da filtri di alta-qualità e da gruppi di filtri sapientemente abbinati. Esistono diversi tipi di filtri per la microscopia a fluorescenza.
1. Filtro assorbente di calore
Il filtro assorbente il calore è un filtro necessario per impedire che la radiazione termica nello spettro della sorgente luminosa danneggi il sistema ottico. I primi microscopi avanzati erano dotati di bottiglie a forma di tamburo che potevano contenere acqua distillata come dispositivi di assorbimento del calore. I moderni microscopi da ricerca su larga-scala sono dotati di filtri in vetro che assorbono il calore nelle scatole luminose della sorgente luminosa o nelle camere delle lampade, che sono lastre di vetro trasparenti e leggermente gialle. I filtri Leitz KG1 (2 mm) e BG38 (4 mm) possono trasmettere quasi tutti gli spettri della luce ultravioletta e visibile, con una velocità di trasmissione della luce fino al 98%. Assorbe selettivamente solo la radiazione fototermica infrarossa.
2. Filtro di eccitazione
I filtri di eccitazione possono assorbire selettivamente linee spettrali a lunga lunghezza d'onda e trasmettere solo luce ultravioletta. I filtri di luce viola, blu e verde sono filtri di eccitazione. Zeiss, Reichert, le serie B di Olympus, la serie G, la serie BG, la serie UG di Shott, le serie H, G, BP di Opton, la serie BP di Leitz e altri filtri ottici sono tutti filtri di eccitazione.
3. Filtro di blocco
Un filtro bloccante è un filtro che assorbe selettivamente le linee spettrali delle onde corte e i raggi infrarossi, consentendo al tempo stesso di vedere le onde più lunghe. La sua funzione è quella di consentire all'osservatore di vedere la fluorescenza eccitata dall'oggetto ispezionato, proteggendo allo stesso tempo la cornea dell'osservatore dai danni UV.
4. Filtro di separazione dei colori
Il filtro di separazione del colore è uno specchio filtrante che riflette la luce di eccitazione sull'oggetto da ispezionare, facendo sì che l'oggetto emetta fluorescenza e quindi trasmette la fluorescenza all'oculare. Questo tipo di filtro può essere utilizzato solo in un condensatore a luce cadente, mentre un microscopio a fluorescenza a luce trasmessa non richiede la separazione dei colori.
5. Filtro antidisturbo
Il filtro di interferenza è un tipo di filtro di eccitazione-ad alte prestazioni. È un filtro realizzato impilando diverse sottili pellicole metalliche tra due lastre di vetro lucido. L'indice di rifrazione di ciascuna pellicola metallica sottile è diverso, quindi le linee spettrali di varie lunghezze d'onda della sorgente luminosa di illuminazione vengono riflesse ripetutamente su ciascuna pellicola metallica. Alcune linee spettrali di determinate lunghezze d'onda vengono cancellate dall'interferenza distruttiva, mentre altre vengono rafforzate dall'interferenza additiva e trasmesse. Ciò si traduce in un filtro con uno spettro di trasmissione ristretto e un'ampiezza di mezzo picco di soli 6-20 nm. La trasmittanza può raggiungere il 60% -70%.
