Competenze e metodi di microscopia a fluorescenza
Parametri tecnici del microscopio a fluorescenza 1. Oculare grandangolare 2. Obiettivo acromatico 3. Convertitore obiettivo a quattro fori 4. Dispositivo a epifluorescenza Sistema di eccitazione blu (B) verde (G) 100W lampada al mercurio 5. Meccanismo di regolazione della messa a fuoco grossolana e fine coassiale: Regola la gamma di messa a fuoco: 15 mm Valore della griglia del micro-movimento: 0,002 mm 6. Tavolo meccanico a doppio strato Gamma di movimento longitudinale: 70 mm Gamma di movimento laterale: 50 mm
Parametri tecnici del microscopio a fluorescenza
1. Oculare grandangolare
2. Obiettivo acromatico
3. Portaobiettivi a quattro aperture
4. Dispositivo di epifluorescenza sistema di eccitazione blu (B) verde (G) lampada al mercurio da 100 W
5. Meccanismo di regolazione della messa a fuoco grossolana e fine coassiale: gamma di messa a fuoco 15 mm valore della griglia di movimento fine 0.002 mm
6. Banco da lavoro meccanico a doppio strato
Gamma di movimento verticale: 70 mm Gamma di movimento laterale: 50 mm
Competenze e metodi di microscopia a fluorescenza
(1) Vetrino
Lo spessore del vetrino deve essere compreso tra 0,8 e 1,2 mm. Un vetrino troppo spesso assorbe più luce da un lato e dall'altro la luce di eccitazione non può essere concentrata sul campione. I vetrini devono essere lisci, di spessore uniforme e privi di evidente autofluorescenza. A volte vengono utilizzati vetrini al quarzo.
(2) Vetro di copertura
Lo spessore del vetro di copertura è di circa 0,17 mm, liscio. Per potenziare la luce di eccitazione si può utilizzare anche un vetrino coprioggetto di interferenza, che è uno speciale vetro coprioggetto rivestito con diversi strati di sostanze (come il fluoruro di magnesio) che hanno diversi effetti di interferenza sulla luce di diverse lunghezze d'onda, che possono rendere il fluorescenza andare senza intoppi. La luce eccitante viene attraversata e riflessa e questa luce di eccitazione riflessa eccita il campione.
(3) Campione
Le fette di tessuto o altri campioni non devono essere troppo spesse. Se è troppo spessa, la maggior parte della luce di eccitazione verrà consumata nella parte inferiore del campione, mentre la parte superiore osservata direttamente dalla lente dell'obiettivo non sarà completamente eccitata. Inoltre, la sovrapposizione di celle o la copertura di impurità, influiscono sul giudizio.
(4) Agente di montaggio
La glicerina è comunemente usata come agente di montaggio, che non deve avere autofluorescenza, incolore e trasparente, e la luminosità della fluorescenza è più luminosa a pH 8.5-9.5, e non è facile svanire rapidamente. Pertanto, una miscela uguale di glicerolo e 0.5mol/l di soluzione tampone di carbonato con un pH compreso tra 9.0 e 9.5 viene comunemente utilizzata come agente di montaggio.
(5) olio per specchi
Generalmente, quando si osservano campioni con microscopi a fluorescenza in campo oscuro e lenti ad immersione per immersione in olio, è necessario utilizzare olio per immersione. È meglio usare uno speciale olio per immersione non fluorescente. Al suo posto è possibile utilizzare anche la glicerina di cui sopra e anche la paraffina liquida, ma l'indice di rifrazione è basso, il che ha un leggero impatto sulla qualità dell'immagine. Influenza.
