I microscopi a fluorescenza possono essere suddivisi in due tipi secondo il principio del percorso ottico:
1. Microscopio a fluorescenza a trasmissione
Nei microscopi a fluorescenza più vecchi, la sorgente luminosa di eccitazione passa attraverso il materiale del campione attraverso un condensatore per eccitare la fluorescenza. Il vantaggio è che la fluorescenza è forte a basso ingrandimento, ma lo svantaggio è che la fluorescenza si indebolisce all’aumentare dell’ingrandimento. Pertanto è adatto solo per l'osservazione di materiali di campioni più grandi.
2.Microscopia ad epifluorescenza
La luce di eccitazione cade dalla lente dell'obiettivo verso il basso sulla superficie del campione, ovvero la stessa lente dell'obiettivo viene utilizzata come condensatore di illuminazione e lente dell'obiettivo per raccogliere la fluorescenza.
È necessario aggiungere un divisore di fascio dicroico (specchio dicroico) al percorso ottico, che forma un angolo di 45o rispetto all'asse ottico. La luce di eccitazione viene riflessa nella lente dell'obiettivo e concentrata sul campione. La fluorescenza generata dal campione viene riflessa dalla superficie della lente dell'obiettivo e dal coperchio. La luce di eccitazione riflessa sulla superficie del vetrino entra contemporaneamente nella lente dell'obiettivo e ritorna al divisore di fascio dicroico per separare la luce di eccitazione e la fluorescenza. La luce di eccitazione rimanente viene quindi assorbita dal filtro di blocco. Se si utilizzano diversi inserti combinati filtro di eccitazione/divisore di fascio bicolore/filtro di blocco, è possibile soddisfare le esigenze di diversi prodotti di reazione di fluorescenza.
Il vantaggio di questo tipo di microscopio a fluorescenza è che il campo visivo è illuminato in modo uniforme, l'immagine è chiara e maggiore è l'ingrandimento, più forte è la fluorescenza.
Quali sono le principali categorie di microscopi ottici?
1. Microscopio ottico ordinario
I normali microscopi ottici sono composti principalmente dalle seguenti parti: il sistema di illuminazione, che coinvolge la sorgente luminosa e il condensatore; il sistema di ingrandimento ottico, che è composto dalla lente dell'obiettivo e dall'oculare. È la parte più critica del microscopio ed è progettata per evitare un'eccessiva aberrazione sferica e cromatica, sia l'oculare che la lente dell'obiettivo sono composti da gruppi di lenti complessi.
2. Microscopio a scansione confocale laser
Il microscopio a scansione confocale laser sembra molto sofisticato e complicato. In effetti, utilizza semplicemente il laser come sorgente di luce di scansione per scansionare rapidamente e visualizzare oggetti punto per punto, linea per linea e superficie per superficie.
In base alla lunghezza d'onda più corta del raggio laser, il raggio stesso è molto sottile, il che determina che il microscopio confocale a scansione laser ha un'alta risoluzione, che è circa tre volte quella di un normale microscopio ottico. Questo tipo di microscopio viene utilizzato per osservare la morfologia cellulare e analizzare quantitativamente i componenti biochimici intracellulari e misurare la morfologia cellulare.
3. Microscopio a campo oscuro
Al centro del condensatore di un microscopio a campo scuro si trova una piastra luminosa che impedisce alla luce di illuminazione di entrare direttamente nella lente dell'obiettivo. Solo la luce riflessa e diffratta dal campione può entrare nella lente dell'obiettivo. Pertanto, lo sfondo del campo visivo è nero e i bordi degli oggetti sono luminosi.
