I microscopi a fluorescenza sono classificati in due tipi in base ai loro percorsi ottici:
1. Microscopio a fluorescenza a trasmissione: la sorgente luminosa di eccitazione viene utilizzata per eccitare la fluorescenza facendo passare il materiale del campione attraverso una lente condensatrice. È possibile utilizzare anche i concentratori di campo scuro comunemente utilizzati e i concentratori ordinari possono essere utilizzati per regolare il riflettore in modo da reindirizzare e lobo laterale la luce di eccitazione sul campione. Questo è un microscopio a fluorescenza relativamente vecchio-stile. Il suo vantaggio è una forte fluorescenza a basso ingrandimento, ma lo svantaggio è che la sua fluorescenza diminuisce con l'aumentare dell'ingrandimento. Pertanto, è meglio osservare campioni di materiali più grandi.
2. Il microscopio a fluorescenza a luce cadente è un nuovo tipo di microscopio a fluorescenza sviluppato nei tempi moderni. A differenza di quanto sopra, la luce di eccitazione cade dalla lente dell'obiettivo verso il basso sulla superficie del campione, utilizzando la stessa lente dell'obiettivo come condensatore di illuminazione e la lente dell'obiettivo per raccogliere la fluorescenza. È necessario aggiungere un divisore di raggio bicolore al percorso ottico, che è a 45 gradi di distanza dall'uranio leggero. Angolo, la luce di eccitazione viene riflessa nella lente dell'obiettivo e focalizzata sul campione. La fluorescenza generata dal campione, così come la luce di eccitazione riflessa dalla superficie della lente dell'obiettivo e del vetro di copertura, entrano nella lente dell'obiettivo e ritornano al divisore di fascio a doppio colore, separando la luce di eccitazione e la fluorescenza. La luce di eccitazione residua viene quindi assorbita dal filtro di bloccaggio. Se vengono utilizzate diverse combinazioni di filtri di eccitazione/separatori di fasci a doppio colore/filtri di blocco, possono soddisfare le esigenze di diversi prodotti di reazione fluorescente. I vantaggi di questo microscopio a fluorescenza sono l'illuminazione uniforme del campo, l'immagine chiara e una fluorescenza più forte con un ingrandimento maggiore.
(2) Istruzioni per l'uso del microscopio a fluorescenza
1. Accendere la sorgente luminosa. La lampada al mercurio ad altissima-pressione deve essere preriscaldata per alcuni minuti per raggiungere la massima luminosità.
2. La microscopia a fluorescenza a trasmissione richiede l'installazione del filtro di eccitazione richiesto tra la sorgente della lampada e il condensatore e il corrispondente filtro di blocco dietro la lente dell'obiettivo. Il microscopio a fluorescenza a luce cadente deve inserire il filtro di eccitazione/il divisore di fascio a doppio colore/il blocco del filtro di blocco richiesto nella fessura del percorso ottico.
3. Osservare con un microscopio a bassa-potenza e regolare il centro della sorgente luminosa in base al dispositivo di regolazione di diversi tipi di microscopi a fluorescenza, in modo che si trovi al centro dell'intero punto di illuminazione.
4. Posizionare il campione e metterlo a fuoco per l'osservazione. È necessario prestare attenzione durante l'uso: non osservare direttamente con gli occhi prima di installare il filtro per evitare danni agli occhi; Quando si osservano i campioni con un microscopio ad olio, è necessario utilizzare uno speciale microscopio ad olio non fluorescente; Una volta spenta, la lampada al mercurio ad alta-pressione non può essere riaccesa immediatamente. Sono necessari 5 minuti per riavviarsi, altrimenti sarà instabile e influenzerà la durata della lampada al mercurio.
(3) Osservando al microscopio a fluorescenza su una piattaforma didattica utilizzando un filtro di luce blu-violetto, si possono vedere cellule colorate con colorante fluorescente arancione di acridina allo 0,01%. Il nucleo e il citoplasma sono eccitati per produrre due diversi colori di fluorescenza (verde scuro e rosso arancio).
