Il microscopio a fluorescenza utilizza metodi e precauzioni
Metodo d'uso:
(1) Posizionare il foglio del materiale sul piano di trasporto.
(2)Accendere il regolatore di tensione del microscopio a fluorescenza. Quindi premere il gruppo di avvio per accendere la lampada UV che non deve essere spenta per 15 minuti e non deve essere riavviata per 3 minuti dopo lo spegnimento.
(3) Ruotare il filtro di eccitazione su v, la pellicola dicroica su v, scegliere il filtro di blocco da 495 o 475 nm.
(4) Scegliere la fluorescenza uvFL40, uvFL100 che riceve la microscopia con lente obiettiva.
(5) Aggiungere olio non fluorescente sul vetrino, prima 40 x e poi 100 x con messa a fuoco microscopica. Mostra fluorescenza.
(7) Poiché il materiale fluorescente mediante irradiazione ultravioletta con la crescita della fluorescenza si indebolisce gradualmente nel tempo, l'esame microscopico dovrebbe cambiare frequentemente il campo visivo.
(8) può anche utilizzare materiale per microscopia a basso ingrandimento uvFL10 o uvFL20 (con basso ingrandimento senza aggiunta di olio non fluorescente).
Metodo di registrazione delle immagini in fluorescenza:
Immagine in fluorescenza vista al microscopio a fluorescenza, una è con le caratteristiche morfologiche, la seconda è con il colore e la luminosità della fluorescenza, nel giudicare i risultati, i due devono essere combinati con un giudizio globale. I risultati vengono registrati secondo indicatori soggettivi, cioè mediante osservazione visiva da parte del lavoratore. Come osservazione qualitativa generale, sostanzialmente affidabile. Con lo sviluppo della tecnologia e della scienza, a vari livelli, si è diffuso l'uso di indicatori oggettivi per registrare i risultati del giudizio, come l'uso dello spettrofotometro cellulare, dell'analizzatore di immagini e di altri strumenti. Tuttavia, i risultati registrati da questi strumenti devono essere accompagnati anche da giudizi soggettivi.
La tecnologia fotografica al microscopio a fluorescenza è molto necessaria per registrare immagini in fluorescenza, poiché la fluorescenza è facile da sbiadire e indebolire, per registrare istantaneamente i risultati della fotografia. Il metodo è sostanzialmente lo stesso della micrografia ordinaria. È sufficiente utilizzare una pellicola fotografica ad alta velocità come ASA200 sopra o 24 sopra. Poiché la luce ultravioletta sull'effetto scoppio della fluorescenza, come i marcatori FITC, nell'irradiazione della luce ultravioletta degli anni '30, la luminosità della fluorescenza è ridotta del 50%. Pertanto, la velocità di esposizione è troppo lenta per catturare l'immagine in fluorescenza. I microscopi a fluorescenza per ricerca generale sono dotati di dispositivi di sistema di microfotografia semiautomatici o completamente automatici.
Precauzioni:
(1) Operare in stretta conformità con i requisiti del manuale di fabbrica del microscopio a fluorescenza, non modificare la procedura arbitrariamente.
(2) L'ispezione dovrebbe essere effettuata nella camera oscura. Dopo essere entrati nella camera oscura, collegare l'alimentatore, accendere la lampada al mercurio ad altissima pressione per 5-15min, attendere fino a quando la sorgente luminosa emette una luce forte per stabilizzarsi e gli occhi si sono completamente adattati alla camera oscura, quindi quindi iniziare ad osservare il campione.
(3) Per evitare danni agli occhi causati dalla luce ultravioletta, è necessario indossare occhiali protettivi durante la regolazione della sorgente luminosa.
(4) controllare il tempo ogni volta a 1 ~ 2 ore è appropriato, più di 90 minuti, l'intensità luminosa della lampada al mercurio ad altissima pressione diminuisce gradualmente, la fluorescenza si indebolisce; campioni irradiati da luce ultravioletta per 3 ~ 5 minuti, anche la fluorescenza è significativamente indebolita; pertanto, * non deve essere superiore a 2 ~ 3 ore.
(5) la durata della sorgente luminosa del microscopio a fluorescenza è limitata, il campione deve essere ispezionato centralmente, al fine di risparmiare tempo e proteggere la sorgente luminosa. Quando fa caldo, è necessario aggiungere una ventola di raffreddamento, la nuova lampadina deve essere registrata dall'inizio del tempo di utilizzo. Quando la lampada è spenta e vuole essere riutilizzata, la lampadina deve essere sufficientemente raffreddata prima dell'accensione. La fonte di luce dovrebbe essere evitata più volte.
(6) Osservare il campione immediatamente dopo la colorazione, poiché la fluorescenza diminuirà gradualmente nel tempo. Se il campione viene posto in un sacchetto di plastica di polietilene conservato a 4 gradi, è possibile ritardare il tempo di indebolimento della fluorescenza e impedire l'evaporazione dell'agente sigillante.
(7) Criteri di giudizio per la luminosità della fluorescenza: generalmente diviso in quattro livelli, cioè "uno" - fluorescenza debole o assente. '+' - solo fluorescenza chiara e visibile. '+ +' - visibile con un luminoso
