Differenze tra microscopi ottici ordinari e microscopi a fluorescenza
Microscopio ottico: è uno strumento ottico che utilizza principi ottici per ingrandire e visualizzare oggetti minuscoli che non possono essere distinti dall'occhio umano, al fine di estrarre informazioni sulle loro microstrutture.
Microscopio a fluorescenza: un microscopio a fluorescenza utilizza la luce ultravioletta come sorgente luminosa per irradiare l'oggetto da ispezionare, facendolo emettere fluorescenza, quindi osserva la forma e la posizione dell'oggetto al microscopio. La microscopia a fluorescenza viene utilizzata per studiare l'assorbimento, il trasporto, la distribuzione e la localizzazione delle sostanze all'interno delle cellule. Alcune sostanze presenti nelle cellule, come la clorofilla, possono emettere fluorescenza se esposte alle radiazioni ultraviolette; Ci sono anche alcune sostanze che non possono emettere fluorescenza da sole, ma possono anche emettere fluorescenza se colorate con coloranti fluorescenti o anticorpi fluorescenti e irradiate con luce ultravioletta. La microscopia a fluorescenza è uno degli strumenti per la ricerca qualitativa e quantitativa su tali sostanze.
Un microscopio ottico è generalmente costituito da un tavolino, un sistema di illuminazione a faretto, una lente obiettivo, un oculare e un meccanismo di messa a fuoco. Il sistema di illuminazione a faretto può ottenere diversi metodi di osservazione, come punti di oggetti scuri su sfondo chiaro (detta illuminazione in campo chiaro) o punti di oggetti luminosi su sfondo scuro (detta illuminazione in campo scuro), cambiando la modalità di illuminazione, per scoprire e osservare meglio le microstrutture in diverse situazioni.
Ci sono le seguenti differenze tra il microscopio a fluorescenza e il microscopio normale:
1. Il metodo di illuminazione è solitamente di tipo cadente, in cui la sorgente luminosa viene proiettata sul campione attraverso una lente obiettivo;
2. La sorgente luminosa è luce ultravioletta, con una lunghezza d'onda più corta e una risoluzione più elevata rispetto ai normali microscopi;
3. Sono presenti due filtri speciali, quello davanti alla sorgente luminosa viene utilizzato per filtrare la luce visibile e quello tra l'oculare e la lente dell'obiettivo viene utilizzato per filtrare la luce ultravioletta per proteggere l'occhio umano.
Il microscopio a fluorescenza è anche un tipo di microscopio ottico, la differenza principale è la lunghezza d'onda di eccitazione. Ciò determina le differenze nella struttura e nei metodi di utilizzo tra i microscopi a fluorescenza e i normali microscopi ottici.
Il microscopio a fluorescenza è uno strumento fondamentale per la chimica cellulare dell'immunofluorescenza. È composto da componenti principali come sorgente luminosa, sistema di piastre filtranti e sistema ottico. Si tratta dell'uso della luce di una certa lunghezza d'onda per eccitare il campione ad emettere fluorescenza, che viene poi ingrandita attraverso un obiettivo e un sistema di oculari per osservare l'immagine fluorescente del campione.
