Determinazione del numero di microrganismi - metodo di conteggio diretto microscopico!
Fondamentale
Il metodo di conteggio diretto microscopico è un metodo semplice, veloce e intuitivo che consiste nel posizionare una piccola quantità della sospensione del campione da testare su uno speciale vetrino (noto anche come contatore di batteri) con un'area e un volume definiti, e contare direttamente sotto un microscopio. Attualmente, i contatori di batteri comunemente usati in patria e all'estero includono: pannello per il conteggio delle cellule del sangue, contatore di batteri Peteroff-Hauser e contatore di batteri Hawksley, ecc. Possono tutti essere usati per contare sospensioni come lieviti, batteri e spore di muffe, e i principi di base sono gli stessi. Gli ultimi due contatori di batteri hanno un volume totale di 0.02 mm3 dopo essere stati coperti con un vetrino coprioggetto e la distanza tra il vetrino coprioggetto e il vetrino è di soli 0,02 mm, quindi cellule piccole come i batteri possono essere osservati e contati con una lente obiettiva a immersione in olio. Oltre all'utilizzo di questi contatori di batteri, esiste anche un metodo di stima che consente di osservare direttamente al microscopio il rapporto tra l'area dello striscio e l'area del campo visivo. Questo metodo viene generalmente utilizzato per l'esame batteriologico del latte. Il vantaggio del metodo di conteggio diretto al microscopio è che è intuitivo, veloce e facile da usare. Ma lo svantaggio di questo metodo è che i risultati misurati sono solitamente la somma di batteri vivi e morti. Al momento, esistono alcuni metodi per superare questa lacuna, come la combinazione di batteri viventi che colorano la coltura della microcamera (breve tempo) e l'aggiunta di inibitori della divisione cellulare per raggiungere lo scopo di contare solo i batteri viventi.
In questo esperimento è stato utilizzato un emocitometro come esempio per eseguire il conteggio diretto al microscopio. Per le modalità di utilizzo degli altri due contabatteri fare riferimento alle istruzioni di ciascun produttore. Il conteggio diretto al microscopio con un emocitometro è un metodo di conteggio microbico comunemente utilizzato. Il piano di conteggio è un vetrino di vetro appositamente realizzato, sul quale quattro fessure formano tre piattaforme; la piattaforma più ampia al centro è divisa in due metà da una breve fessura orizzontale, e ciascun lato della piattaforma è rivestito da una griglia. Ogni griglia è divisa in nove grandi quadrati e il grande quadrato centrale è la camera di conteggio. La scala della stanza di conteggio ha generalmente due specifiche, una è che un quadrato grande è diviso in 25 quadrati medi, e ogni quadrato centrale è diviso in 16 quadrati piccoli; l'altro è che un quadrato grande è diviso in 16 quadrati medi, e ogni quadrato centrale è diviso in 25 quadrati piccoli, ma non importa quale tipo di tabellone di conteggio, ci sono 400 quadrati piccoli in ogni grande quadrato. La lunghezza del lato di ciascun quadrato grande è 1 mm, quindi l'area di ciascun quadrato grande è 1 mm 2. Dopo aver coperto il vetrino coprioggetto, l'altezza tra il vetrino coprioggetto e il vetrino scorrevole è 0,1 mm, quindi il volume del camera di conteggio è 0,1 mm (un decimillesimo di millilitro).
