Determinazione della popolazione microbica - metodo di conteggio microscopico diretto!
I. Requisiti per lo scopo
1,Chiarire il principio del conteggio delle piastre dell'ematocrito.
2, padroneggiare il metodo di conteggio microbico utilizzando la piastra dell'ematocrito.
II. Principi di base
Il metodo di conteggio diretto al microscopio consiste in una piccola quantità di sospensione del campione da testare su uno speciale vetrino con un'area e un volume definiti (noto anche come contatore batteriologico), nel conteggio diretto al microscopio con un metodo semplice, rapido e intuitivo. Attualmente, i contatori batteriologici comunemente usati nazionali ed esteri sono: piastra per il conteggio delle cellule del sangue, contatori batteriologici Peteroff-Hauser e contatori batteriologici Hawksley, ecc., che possono essere utilizzati per lieviti, batteri, spore di muffe e altre sospensioni di conteggio, il principio di base è la stessa. Gli ultimi due tipi di contatori hanno un volume totale di 0.02 mm3 dopo l'inserimento del coprioggetto e la distanza tra il coprioggetto e la fetta portante è di soli 0,02 mm, quindi celle più piccole come i batteri possono essere osservati e contati con un obiettivo a immersione in olio. Oltre all'utilizzo di questi contatori esiste anche un metodo di stima del rapporto tra l'area dello striscio e l'area del campo visivo osservato direttamente al microscopio, che viene generalmente utilizzato per l'esame batteriologico del latte vaccino. I vantaggi del metodo di conteggio diretto al microscopio sono intuitivi, rapidi e facili da usare. Tuttavia, lo svantaggio di questo metodo è che il risultato è solitamente la somma di organismi vivi e morti. Esistono alcuni metodi per superare questo svantaggio, come la combinazione di colture di microcamere colorate con batteri vivi (breve tempo) e l'aggiunta di inibitori della citocinesi per raggiungere lo scopo di contare solo gli organismi vivi.
Fasi operative
1, preparazione della sospensione batterica
Utilizzare una soluzione salina sterile per produrre una sospensione batterica di lievito di birra con una concentrazione adeguata.
2, camera di conteggio dello specchio
Prima di aggiungere i campioni, ispezionare innanzitutto la camera di conteggio della piastra di conteggio. Se è presente dello sporco, è necessario pulirlo e asciugarlo prima del conteggio.
3, aggiunta di campioni
Pulire e asciugare la piastra per il conteggio delle cellule del sangue coperta con un vetrino coprioggetto, quindi utilizzare una buretta capillare sterile per scuotere la sospensione di lievito di birra dal bordo del vetrino coprioggetto per far cadere una piccola goccia, in modo che il liquido batterico lungo lo spazio attraverso la penetrazione capillare nel camera di conteggio automaticamente, generalmente la camera di conteggio può essere riempita con liquido batterico. Quando si prelevano i campioni, la soluzione batterica deve essere prima agitata bene; quando si aggiungono i campioni, la camera di conteggio non deve contenere bolle d'aria.
4, conteggio del microscopio
Dopo aver aggiunto il campione, lasciarlo riposare per 5 minuti, quindi posizionare la piastra per il conteggio delle cellule del sangue sul piano portante del microscopio, individuare prima la posizione della camera di conteggio a basso ingrandimento, quindi modificarla con un ingrandimento elevato per il conteggio. Regolare l'intensità della luce del microscopio in modo appropriato, poiché il microscopio con un riflettore di luce dovrebbe anche prestare attenzione alla luce che non deve essere distorta da un lato, altrimenti il campo visivo non è facile da chiarire con la lingua la linea della griglia della camera di conteggio, o vedere solo la linea verticale o vedere solo la linea orizzontale. Se il liquido batterico risulta essere troppo denso o troppo fluido prima del conteggio, è necessario regolare nuovamente la diluizione prima del conteggio. Sono appropriati requisiti generali di diluizione del campione di circa 5-10 batteri in ciascuna cella. Per ciascuna camera di conteggio, vengono selezionati per il conteggio gli organismi presenti nei 5 compartimenti centrali (4 angoli e uno scomparto centrale al centro). Gli organismi situati sulle linee della griglia vengono solitamente contati solo sulle linee superiore e destra. Nel caso del lievito in erba, quando il corpo in erba raggiunge la metà delle dimensioni della cellula madre, viene conteggiato come due organismi. Contare un campione dalle due camere di conteggio nel valore medio per calcolare il contenuto batterico del campione.
5. Pulizia della piastra dell'ematocrito
Dopo l'uso, sciacquare la piastra per il conteggio delle cellule del sangue con acqua sotto il rubinetto, non utilizzare oggetti duri per lavarla e spazzolarla, asciugarla da soli o utilizzare un asciugacapelli per asciugarla dopo il lavaggio. Ispezionare al microscopio la piastra per vedere se sono presenti organismi residui o altri precipitati in ciascun compartimento. Se non è pulito, il lavaggio dovrà essere ripetuto finché non sarà pulito.
