Descrivere in dettaglio le fasi di selezione e i metodi delle sonde fluorescenti per la microscopia confocale
Negli esperimenti con microscopi confocali, alcuni indicatori sperimentali possono essere rilevati utilizzando l'autofluorescenza del campione stesso o sostanze esogene, ma la maggior parte delle sostanze da testare non hanno fluorescenza misurabile e devono essere etichettate con sonde fluorescenti. Ha un segnale fluorescente misurabile. Quindi, come scegliere le sonde fluorescenti per la microscopia confocale?
1. Determinare gli indicatori da testare in base allo scopo dell'esperimento
Una volta determinato l'indice di rilevamento, viene determinato anche l'intervallo di selezione delle sonde fluorescenti. Si può vedere che la scelta di quale sonda fluorescente utilizzare nell'esperimento è determinata dallo scopo dell'esperimento. Ad esempio, se lo scopo dell'esperimento è studiare i cambiamenti degli ioni calcio nei cardiomiociti quando si verifica la fibrillazione atriale, è possibile determinare che la sostanza da testare sono gli ioni calcio nei cardiomiociti e l'intervallo di selezione delle sonde fluorescenti è limitato a sonde di ioni di calcio in grado di etichettare le cellule viventi. Ago.
2. Determinare la gamma di sonde fluorescenti disponibili
Per nuove sostanze o indicatori sperimentali, se lo scopo dell'esperimento non è quello di esplorare nuove sonde fluorescenti, puoi scegliere di applicare sonde mature e metodi di etichettatura. Il tipo o la gamma di sonde fluorescenti che possono etichettare la sostanza da testare può essere determinato ricercando letteratura autorevole o cataloghi di prodotti di note aziende di reagenti in patria e all'estero.
3. Verificare se le caratteristiche della sonda fluorescente soddisfano i requisiti per la preparazione di campioni fluorescenti
Le caratteristiche delle sonde fluorescenti influiscono direttamente sull'etichettatura dei campioni e sui risultati sperimentali. Pertanto, prima di selezionare sonde fluorescenti e campioni di etichettatura nell'esperimento, è necessario comprendere appieno le loro caratteristiche di fluorescenza. Le caratteristiche delle sonde fluorescenti da studiare includono:
1. Caratteristiche di reazione di sonde luminose e campioni
2. Sensibilità e intensità di fluorescenza delle sonde fluorescenti
3. Proprietà spettrali dei campioni marcati con sonde fluorescenti
4. Stabilità della fluorescenza
5. Interazione tra fluorescenza multipla nel campione
