Biomicroscopia riguardante il volume dei blocchi di tessuto
Microscopia biologica Finora, la fissazione a freddo, la sezione ultrasottile congelata e la liofilizzazione sono metodi di routine per le microsezioni radiografiche di tessuti e cellule. I dettagli di questo metodo sono spiegati come segue:
Per i microscopi biologici con condensatore, il condensatore può essere spostato su e giù per rendere moderata la luminosità e anche l'apertura della luce variabile può essere modificata per ottenere una luminosità moderata di 9b. Se la luce è solare, il condensatore può essere sollevato in modo appropriato e l'apertura della sorgente luminosa variabile può essere opportunamente allargata. Se la luce è troppo forte, la lente del condensatore può essere abbassata in modo appropriato e l'apertura della luce intersecante può essere ridotta in modo appropriato. Se ti senti ancora abbagliante in questo caso, puoi scegliere un filtro appropriato e posizionarlo sulla staffa sotto il condensatore. Questo rovere saprà ottenere la luminosità che ti soddisfa. Naturalmente, regolare le posizioni superiore e inferiore del condensatore, regolare la dimensione dell'apertura della lettura ottica variabile e selezionare un filtro adatto richiede un certo periodo di pratica per acquisire esperienza.
Una questione molto importante nella microscopia biologica è che nel processo di campionamento e separazione delle cellule, dopo la liofilizzazione e l'incorporamento della resina (FD), dopo il congelamento di aggregati ultrasottili e dopo la liofilizzazione, il contenuto di 65 elementi in ciascuna parte devono essere maneggiati con cura. Le cellule da analizzare non possono essere danneggiate. Perché la microanalisi a raggi X non solo comporta molti passaggi, ma costa anche molto. Se le cellule analizzate sono cellule danneggiate o cellule morte dopo un lungo periodo e un'elaborazione in più fasi, è molto deplorevole trarre conclusioni errate. Ad esempio, i cardiomiociti separati dal trattamento con collagenasi hanno due forme, una è un lungo bastoncino
Biomicroscopia La quantità e la distribuzione degli elettroliti in questi due tipi di cellule sono piuttosto diverse. Na è molto alto e K è molto basso nei cardiomiociti circolari e la concentrazione di ca nei nematodi è molto alta. Dopo aver verificato con altri metodi di analisi, è dimostrato che l'alto Na e il basso K delle cellule rotonde e l'alto Ca nei mitocondri sono dovuti al danneggiamento della membrana cellulare durante il processo di separazione cellulare. Il metodo di fissazione ghiacciata di cellule e tessuti consiste solitamente nell'adottare prima l'estinzione e la fissazione, quindi conservarli in azoto liquido. La fissazione tempra è molto importante per l'effetto della conservazione. Le cellule viventi o i tessuti freschi sono ricchi di acqua. Durante la tempra, le parti delle cellule o dei tessuti che sono a diretto contatto con il refrigerante frantumato (soprattutto quando si tempra con azoto liquido) vengono spesso congelate e fissate per prime, formando così un "guscio", che ostacola Le parti centrali delle celle sono state schiacciato e fissato a freddo. Pertanto, quando si esegue l'analisi della microarea X-line, si scopre spesso che ci sono cristalli di ghiaccio al centro di cellule più grandi. Per evitare che ciò accada, viene utilizzata come refrigerante rotto una sostanza con un punto di fusione superiore a quello dell'azoto liquido ma inferiore a quello dell'806c. Esistono molte di queste sostanze, ma la più facile da ottenere, la più economica è il propano concentrato (punto di ebollizione - 42.120c, punto di fusione - 187.10c, peso molecolare 44.1) e la velocità di raffreddamento è la più veloce . Ma il suo svantaggio è che è infiammabile.
Il microscopio biologico può mettere la fibra muscolare su un rack speciale, in modo che quando la contrazione della fibra muscolare raggiunge una certa fase e deve essere fissata, avviare immediatamente l'ugello per spruzzare propano liquido sulla fibra muscolare per spegnerla e fissarla. Quindi le fibre muscolari insieme al telaio sono state estratte e messe in azoto liquido. Se si fissano cellule del sangue o cellule isolate, concentrare prima le cellule mediante centrifugazione a bassa velocità, trasferire le cellule in una fiala d'argento con buona conduttività termica, posizionare la fiala in propano liquido e congelare per la fissazione. Durante il fissaggio del pancreas di ratto nel laboratorio di Hall, i due blocchi di acciaio sono stati pre-raffreddati con elio liquido (o azoto liquido) e i due blocchi di rame sono stati bloccati con una pinza e posizionati sulla parte anteriore e posteriore del pancreas per temprare e fissare il pancreas. I tessuti o le cellule possono essere conservati in azoto liquido per la conservazione a lungo termine dopo l'estinzione e il fissaggio.
Microscopia biologica Oltre al metodo della sezione ultrasottile congelata attualmente più rispettato, ecco un'altra tecnica di deposizione utilizzata dagli scienziati. Una sostanza viene aggiunta per formare un sedimento con il componente da analizzare per immobilizzarlo prima dell'analisi, quindi il sedimento viene analizzato. Ad esempio, le persone usano spesso ossalato e piroantimonato per depositare ca nelle cellule muscolari. Il primo non è abbastanza sensibile alla bassa concentrazione di Ca nel citoplasma; il piroantimonato è più sensibile e può formare depositi densi di elettroni con Ca libero nel cervello, ma il piroantimonato non è compatibile con sodio, manganese, bario, ferro Si formano anche depositi meno specifici. Il processo di preparazione del campione è simile alla preparazione dei normali campioni di sezione ultrasottile del microscopio elettronico a trasmissione, la differenza è che il piroantimonato di potassio al 3% (soluzione salina tampone fosfato, pH 7,6) è stato fissato per 6 ore prima della fissazione e sulle sezioni ultrasottili muscolari colorate, Sono stati osservati depositi neri nelle linee mediane delle bande A e 2 di ciascun sarcomero e sono state utilizzate sezioni non colorate per la microanalisi a raggi X. La diaminobenzidina tetracloridrato (DAB) è stata utilizzata per precipitare sostanze contenenti eme e così via. La combinazione della reazione di precipitazione istochimica e del ponte di microdifferenziazione a raggi X può essere presa in considerazione nei laboratori che non dispongono di condizioni di sezione ultrasottile congelata. Il semi-quantitativo può essere eseguito in base all'altezza del picco degli elementi da analizzare
