Metodi e fasi di elaborazione dei campioni per la microscopia elettronica
Prima di utilizzare un microscopio elettronico a trasmissione per osservare campioni biologici, i campioni devono essere pre-elaborati. Gli scienziati utilizzano diversi metodi di elaborazione in base alle diverse esigenze di ricerca.
Fissazione: per preservare il più possibile il campione, viene utilizzata la glutaraldeide per indurire il campione e l'acido osmico per colorare il grasso.
Fissazione a freddo: il campione viene rapidamente congelato in etano liquido in modo che l'acqua non cristallizzi e formi invece ghiaccio amorfo. I campioni conservati in questo modo presentano meno danni, ma il contrasto dell'immagine è molto basso.
Disidratazione: utilizzare etanolo e acetone per sostituire l'acqua.
Imbottito: il campione può essere diviso dopo essere stato imbottito.
Segmentazione: il campione viene tagliato a fettine sottili utilizzando una lama diamantata.
Colorazione: gli atomi pesanti come il piombo o l'uranio diffondono gli elettroni in modo più forte rispetto agli atomi più leggeri e possono quindi essere utilizzati per aumentare il contrasto.
Prima di utilizzare un microscopio elettronico a trasmissione per osservare i metalli, il campione deve essere
Virus al microscopio elettronico
Tagliare in fette molto sottili (circa 0,1 mm) e poi utilizzare la lucidatura elettrolitica per continuare ad assottigliare il metallo spesso finisce per formare un buco al centro del campione dove gli elettroni possono passare attraverso il metallo molto sottile. I metalli che non possono essere lucidati elettroliticamente o i materiali non conduttivi o con scarsa conduttività, come il silicio, vengono generalmente assottigliati meccanicamente e quindi lavorati mediante attacco ionico. Per evitare che i campioni non conduttivi accumulino elettricità statica in un microscopio elettronico a scansione, le loro superfici devono essere coperte con uno strato conduttivo.
Perché i microscopi elettronici hanno una risoluzione più elevata?
Come suggerisce il nome, il cosiddetto microscopio elettronico è un microscopio che utilizza fasci di elettroni come fonte di illuminazione. Poiché il fascio di elettroni può piegarsi sotto l'azione di un campo magnetico esterno o di un campo elettrico, formando un fenomeno di rifrazione simile a quello della luce visibile che passa attraverso il vetro, possiamo sfruttare questo effetto fisico per creare una "lente" per il fascio di elettroni, in tal modo sviluppo di un microscopio elettronico. La caratteristica di un microscopio elettronico a trasmissione (TEM) è che utilizziamo fasci di elettroni che passano attraverso il campione per ottenere l'immagine, il che è diverso da un microscopio elettronico a scansione (microscopio elettronico a scansione, SEM). Poiché la lunghezza d'onda delle onde elettroniche è molto più piccola della lunghezza d'onda della luce visibile (la lunghezza d'onda delle onde elettroniche da 100kV è 0,0037 nm, mentre la lunghezza d'onda della luce viola è 400 nm), secondo l'ottica In teoria, possiamo aspettarci che il potere risolutivo dei microscopi elettronici sia molto migliore di quello dei microscopi ottici. Infatti, la capacità di risoluzione dei moderni microscopi elettronici ha raggiunto 0,1 nm. Il libro di testo facoltativo di fisica per gli studenti delle scuole superiori lo spiega in modo più dettagliato (piccole informazioni dietro l'effetto fotoelettrico)
