Metodo di conteggio diretto dei microrganismi utilizzando un microscopio
L'utilizzo di un emocitometro per contare direttamente i microrganismi al microscopio è un metodo comunemente utilizzato per la conta microbica. Il vantaggio di questo metodo è la sua intuitività e velocità. Posizionare la sospensione batterica opportunamente diluita (o sospensione di spore) nella camera di conteggio tra il vetrino dell'emocitometro e il vetrino coprioggetto e contare al microscopio. Grazie al volume costante della stanza di conteggio (0,1 mm2), il numero totale di microrganismi per unità di volume può essere convertito in base al numero di microrganismi osservati al microscopio. Poiché questo metodo calcola la somma delle cellule batteriche vive e morte, è noto anche come metodo della conta batterica totale.
Una piastra per il conteggio delle cellule del sangue è solitamente un vetrino appositamente progettato con quattro scanalature che formano tre piattaforme. La piattaforma centrale è divisa a metà da una breve scanalatura orizzontale e ciascun lato della piattaforma è inciso con una griglia. Ogni griglia è divisa in nove grandi quadrati e il grande quadrato al centro è la sala di conteggio, dove viene effettuata la conta microbica. La struttura della piastra per il conteggio delle cellule del sangue è mostrata nella Figura VIII-1.
Generalmente ci sono due specifiche per la scala della sala di conteggio. Il primo è che un quadrato grande è diviso in 16 quadrati medi, e ogni quadrato centrale è ulteriormente diviso in 25 quadrati piccoli (Figura VIII -2); Un altro metodo consiste nel dividere un quadrato grande in 25 quadrati medi, e ciascun quadrato centrale è ulteriormente diviso in 16 quadrati piccoli (Figura VIII -1, C). Ma indipendentemente dalla dimensione del tabellone di conteggio, il numero di quadrati piccoli in ogni quadrato grande è lo stesso, cioè 16 × 25=400 quadrati piccoli, come mostrato nella Figura VIII-2.
Se la lunghezza del lato di ciascun quadrato grande è 1 mm, l'area di ciascun quadrato grande è 1 mm2. Dopo aver coperto con un vetrino coprioggetto, l'altezza tra il vetrino e il vetrino coprioggetto è 0,1 mm, quindi il volume della camera di conteggio è 0,1 mm3.
Durante il conteggio, viene solitamente contato il numero totale di batteri in cinque quadrati, quindi si ottiene il valore medio di ciascun quadrato. Moltiplicandolo per 16 o 25 si ottiene il numero totale di batteri in un grande quadrato, che viene poi convertito nel numero totale di batteri in 1 ml di soluzione batterica.
