Principio di funzionamento del microscopio confocale laser
La microscopia confocale laser si basa sull'imaging del microscopio a fluorescenza con l'aggiunta di un dispositivo di scansione laser, l'uso dell'elaborazione delle immagini del computer, la risoluzione dell'imaging ottico aumentata del 30% - 40%, l'uso dell'eccitazione della luce ultravioletta o visibile della fluorescenza sonde, in modo da ottenere l'immagine in fluorescenza della microstruttura interna di cellule o tessuti, a livello subcellulare per osservare segnali fisiologici e cambiamenti della morfologia cellulare, come Ca2+, PH, potenziale di membrana, ecc., è diventato una nuova generazione di potenti strumenti di ricerca in morfologia, biologia molecolare, neuroscienze, farmacologia, genetica e altri campi. Il sistema di imaging laser confocale è una nuova e potente generazione di strumenti di ricerca nei campi della morfologia, biologia molecolare, neuroscienze, farmacologia, genetica e così via. Il sistema di imaging confocale laser può essere utilizzato per osservare una varietà di tessuti e cellule colorati, non colorati e marcati in modo fluorescente, ecc., per osservare e studiare la crescita e lo sviluppo di sezioni di tessuto e cellule in vivo e per studiare e misurare le cellule intracellulari trasporto di sostanze e conversione di energia. È in grado di effettuare lo studio dei cambiamenti di ioni e PH nelle cellule viventi (RATIO), ricerca sui neurotrasmettitori, tomografia a interferenza differenziale e fluorescenza, tomografia a fluorescenza multipla e sovrapposizione, analisi spettroscopica di fluorescenza di indicatori di fluorescenza di analisi quantitativa di campioni di fluorescenza di tempo- scansione ritardata e componenti dinamici della struttura dinamica tridimensionale di tessuti e cellule, analisi del trasferimento dell'energia di risonanza della fluorescenza, ricerca sull'ibridazione in situ fluorescente (FISH), ricerca sul citoscheletro (FISH) e studio del citoscheletro. FISH), ricerca sul citoscheletro, ricerca sulla localizzazione dei geni, analisi del prodotto PCR in tempo reale in situ, ricerca sul recupero dello sbiancamento fluorescente (FRAP), ricerca sulla comunicazione intercellulare, ricerca interproteica, ricerca sul potenziale di membrana e sulla fluidità della membrana, ecc., per completare il analisi di immagini, analisi e ricostruzione tridimensionale e altre analisi.
Aree di applicazione del sistema di microscopio confocale laser:
Riguarda medicina, ricerca scientifica su animali e piante, biochimica, **logia, biologia cellulare, tessuti embrionali, scienze alimentari, genetica, farmacologia, fisiologia, ottica, patologia, botanica, neuroscienze, biologia marina, scienza dei materiali, scienze elettroniche, meccanica, petrolio geologia, mineralogia.
Principi di base
Il microscopio ottico tradizionale utilizza una sorgente luminosa di campo, l'immagine di ogni punto del campione sarà disturbata dalla diffrazione o diffusione della luce dai punti vicini; il microscopio confocale laser utilizza un raggio laser attraverso il foro stenopeico illuminante per formare una sorgente luminosa puntiforme per scansionare ogni punto sul piano focale del campione, il punto irradiato sul campione verrà ripreso nel foro stenopeico di rilevamento e quindi ricevuto dal foro stenopeico di rilevamento dopo il tubo moltiplicatore di punti (PMT) o il dispositivo di elettroaccoppiamento freddo (cCCD), punto per punto o linea per linea, e quindi essere rapidamente visualizzato sul monitor del computer. Ricevuta punto per punto o linea per linea dal PMT o dal cCCD dietro il foro stenopeico della sonda, l'immagine fluorescente si forma rapidamente sullo schermo del monitor del computer. Il foro stenopeico di illuminazione e quello di rilevazione sono coniugati rispetto al piano focale dell'obiettivo, i punti sul piano focale sono focalizzati sul foro stenopeico di illuminazione e su quello di emissione contemporaneamente, ed i punti esterni al piano focale non saranno focalizzati essere ripreso nel foro stenopeico di rilevamento, in modo che l'immagine confocale ottenuta sia una sezione trasversale ottica del campione, superando lo svantaggio della sfocatura dell'immagine del microscopio ordinario.
