Quali sono le differenze tra la microscopia a fluorescenza e la microscopia invertita
Il microscopio è uno strumento importante nella coltura cellulare e nei relativi esperimenti sui derivati. Attualmente sul mercato sono disponibili diversi tipi di microscopi e scegliere un microscopio che soddisfi le esigenze e sia adatto è una sfida. Di seguito, introdurremo i principi dei microscopi invertiti e dei microscopi a fluorescenza affinché tutti possano scegliere.
Il microscopio invertito, come un normale microscopio, è costituito principalmente da tre parti: parte meccanica, parte luminosa e parte ottica.
La composizione di un microscopio invertito è la stessa di un normale microscopio verticale, tranne per il fatto che la lente dell'obiettivo e il sistema di illuminazione sono invertiti, con il primo sotto il tavolino e il secondo sopra il tavolino.
Questa struttura amplia notevolmente la distanza effettiva tra il sistema di faretti luminosi e il palco, facilitando il posizionamento di strumenti di osservazione più spessi come piastre di coltura e bottiglie di colture cellulari (ovviamente si possono utilizzare anche vetrini), mentre la distanza di lavoro tra il lente dell'obiettivo e il materiale non deve essere molto grande.
Il microscopio invertito viene utilizzato da istituzioni mediche e sanitarie, università e istituti di ricerca per osservare microrganismi, cellule, batteri, colture di tessuti, sospensioni, sedimenti, ecc. Può osservare continuamente il processo di proliferazione e divisione cellulare e batterica nel mezzo di coltura e può catturare qualsiasi forma di questo processo.
Ampiamente utilizzato in campi quali citologia, parassitologia, oncologia, immunologia, ingegneria genetica, microbiologia industriale e botanica.
La microscopia a fluorescenza viene utilizzata per studiare l'assorbimento, il trasporto, la distribuzione e la localizzazione delle sostanze all'interno delle cellule.
Per l'oggetto testato, esistono due modi per generare fluorescenza: fluorescenza spontanea, che viene emessa direttamente dall'irradiazione ultravioletta; La fluorescenza secondaria si verifica quando l'oggetto osservato viene trattato con coloranti fluorescenti ed esposto alla luce ultravioletta prima di emettere fluorescenza.
Alcune sostanze presenti nelle cellule, come la clorofilla, producono fluorescenza spontanea dopo essere state esposte alla radiazione ultravioletta; Alcune sostanze stesse potrebbero non emettere fluorescenza, ma se colorate con coloranti fluorescenti o anticorpi fluorescenti, possono anche emettere fluorescenza secondaria sotto la radiazione ultravioletta.
Un microscopio a fluorescenza utilizza una sorgente luminosa puntiforme ad alta efficienza luminosa per emettere una determinata lunghezza d'onda della luce (UV 365 nm o UV blu 420 nm) attraverso un sistema di filtraggio del colore come luce di eccitazione, che eccita le sostanze fluorescenti nel campione per emettere vari colori di fluorescenza. Successivamente, viene osservato attraverso l'ingrandimento della lente dell'obiettivo e dell'oculare.
In questo modo, anche con una fluorescenza debole, è facilmente riconoscibile e altamente sensibile su sfondi a forte contrasto. Viene utilizzato principalmente per studiare la struttura, la funzione e la composizione chimica delle cellule.
