Quali sono i vantaggi della microscopia laser confocale
Rispetto ai tradizionali microscopi a campo largo, la microscopia confocale a scansione laser ha le caratteristiche di alta definizione, alta risoluzione e alta sensibilità. È ampiamente utilizzato nel campo della biomedicina ed è diventato un importante strumento di imaging in questo campo. Perché il confocale può ottenere così tanto amore e quali vantaggi ha? Questo articolo elenca tre aspetti per discutere i vantaggi del confocale.
Raccogli il segnale solo sul piano focale, rendendo l'immagine chiara dalla sfocatura
In che modo la microscopia confocale ottiene questo vantaggio? Ciò è dovuto all'hardware confocale chiave: il foro stenopeico, come mostrato nella Figura 2. È un piccolo foro davanti al rivelatore e posizionato sul piano ottico coniugato al piano focale del campione. Quando la luce di eccitazione irradia il campione, sia il piano focale che il piano non focale dell'area del campione saranno eccitati per generare segnali di fluorescenza, regolare la dimensione appropriata del foro stenopeico (di solito 1 Au), in modo che il segnale di fluorescenza sul piano focale (linea tratteggiata verde) possono essere Segnali fluorescenti (linee tratteggiate rosse e blu) che passano attraverso il foro stenopeico per raggiungere il rivelatore fuori dal piano focale non possono raggiungere il rivelatore attraverso il foro stenopeico. Attraverso l'aggiunta di pinhole hardware, il confocale può ottenere immagini chiare e di alta qualità senza modificare il metodo di realizzazione dei normali microscopi a fluorescenza.
A causa dell'esistenza del foro stenopeico, possiamo acquisire il segnale solo sul piano focale e ottenere un'immagine bidimensionale ad alta risoluzione. Regolando continuamente la posizione dell'asse Z, è possibile ottenere immagini bidimensionali in diverse posizioni dell'asse Z e una serie di immagini continue "a fette ottiche". Dopo aver ottenuto queste fette ottiche, il modulo 3D dotato del software dello strumento può essere utilizzato per ricostruire l'immagine 3D per costruire un'immagine 3D chiara. Questa raccolta continua e non distruttiva di immagini di sezioni ottiche realizza la funzione di "cella CT".
L'accuratezza dei risultati di colocalizzazione è strettamente correlata alla risoluzione dell'immagine, quindi è necessario scegliere un metodo di imaging a risoluzione più elevata quando si eseguono esperimenti di colocalizzazione. Rispetto ai microscopi tradizionali, la microscopia confocale è diventata un potente strumento per la ricerca sulla colocalizzazione grazie ai suoi vantaggi ad alta risoluzione.
A causa dell'esistenza del limite di diffrazione, la risoluzione ottica confocale convenzionale è di circa 200 nm. Quando abbiamo bisogno di osservare strutture più grandi di 200 nm, il confocale può determinare con precisione il grado di colocalizzazione. Se è richiesta l'analisi della colocalizzazione, è possibile selezionare il modulo di analisi della colocalizzazione fornito nel software confocale.
