Microscopio biofluorescenza verticale
Il principio della microscopia a fluorescenza è quello di utilizzare una sorgente di luce a punta altamente efficiente (come una lampada al mercurio a pressione ultra-alta) per emettere una certa lunghezza d'onda di luce (come la luce ultravioletta 3650 λ o la luce blu viola 4200 λ) attraverso un sistema di filtro di colore attraverso la luce dell'eccitazione, che eccita le sostanze fluorescenti nel campione per ammirare la fluorescenza di fluosi di fluosi. Quindi, viene filtrato da un filtro bloccante (o sopprimente) dietro l'obiettivo e osservato attraverso l'effetto di ingrandimento dell'oculare.
Il filtro bloccante ha due funzioni: in primo luogo, assorbe e blocca la luce di eccitazione dall'entrare nell'oculare per evitare di interferire con fluorescenza e danneggiare gli occhi; Il secondo è quello di selezionare e consentire il passaggio di fluorescenza specifica, esibendo un colore fluorescente specifico.
I microscopi a fluorescenza possono essere divisi in due tipi in base al principio del percorso della luce:
1. Microscopio a fluorescenza di trasmissione
I microscopi di fluorescenza più vecchi usano un riflettore per eccitare la fluorescenza passando la sorgente di luce di eccitazione attraverso il materiale del campione. Il suo vantaggio è una forte fluorescenza a basso ingrandimento, ma il suo svantaggio è che la sua fluorescenza diminuisce con l'aumentare dell'ingrandimento. Quindi è adatto solo per osservare materiali per campioni più grandi.
2. Microscopio a fluorescenza in calo della luce
La luce di eccitazione cade dalla lente oggettiva sulla superficie del campione, usando lo stesso obiettivo del condensatore di illuminazione e la lente obiettiva per la raccolta di fluorescenza.
Un splitter a raggio a doppio colore (specchio dicroico) deve essere aggiunto al percorso ottico, che forma un angolo di 45 gradi con l'asse ottico. La luce di eccitazione si riflette nella lente oggettiva e si concentra sul campione. La fluorescenza generata dal campione, così come la luce di eccitazione riflessa dalla superficie della lente oggettiva e del vetro di copertura, immettere contemporaneamente la lente obiettiva e tornare allo splitter a raggio a doppio colore per separare la luce di eccitazione e la fluorescenza. La luce di eccitazione residua viene quindi bloccata dall'assorbimento del filtro. Se vengono utilizzate diverse combinazioni di filtri di eccitazione, separatori a fascio a doppio colore e filtri bloccanti, possono soddisfare le esigenze di diversi prodotti di reazione fluorescente.
I vantaggi di questo microscopio a fluorescenza sono l'illuminazione uniforme sul campo, l'imaging chiaro e la fluorescenza più forte con ingrandimento maggiore.
