Esistono due tipi di microscopi a fluorescenza in base ai loro percorsi luminosi.
1. Microscopio a fluorescenza a trasmissione: la sorgente luminosa di eccitazione passa attraverso il materiale del campione attraverso un condensatore per eccitare la fluorescenza. Viene comunemente utilizzato un collettore a campo scuro, oppure è possibile utilizzare un collettore ordinario, e il riflettore è regolato per deviare e irradiare lateralmente la luce di eccitazione sul campione. Questo è un vecchio microscopio a fluorescenza. Il vantaggio è che la fluorescenza è forte a basso ingrandimento, ma lo svantaggio è che la fluorescenza si indebolisce all’aumentare dell’ingrandimento. Pertanto, è meglio osservare materiali campione più grandi.
2. Il microscopio a epifluorescenza è un nuovo tipo di microscopio a fluorescenza sviluppato nei tempi moderni. La differenza rispetto a quanto sopra è che la luce di eccitazione cade verso il basso dalla lente dell'obiettivo alla superficie del campione, cioè la stessa lente dell'obiettivo viene utilizzata come condensatore di illuminazione e lente dell'obiettivo per raccogliere la fluorescenza. È necessario aggiungere un divisore di raggio a due colori al percorso ottico, che è pari al 45% con l'uranio ottico. Angolo, la luce di eccitazione viene riflessa nella lente dell'obiettivo e concentrata sul campione. La fluorescenza generata dal campione e la luce di eccitazione riflessa dalla superficie della lente dell'obiettivo e dalla superficie del vetro di copertura entrano contemporaneamente nella lente dell'obiettivo e ritornano al divisore di fascio dicromatico, in modo che la luce di eccitazione separata dalla fluorescenza, l'eccitazione residua la luce viene poi assorbita dal filtro bloccante. Se si utilizzano diversi inserti combinati filtro di eccitazione/divisore di fascio bicolore/filtro di blocco, è possibile soddisfare le esigenze di diversi prodotti di reazione di fluorescenza. Il vantaggio di questo tipo di microscopio a fluorescenza è che il campo visivo è illuminato in modo uniforme, l'immagine è chiara e maggiore è l'ingrandimento, più forte è la fluorescenza.
(2) Come utilizzare il microscopio a fluorescenza.
1. Accendi la sorgente luminosa e la lampada al mercurio ad altissima pressione deve riscaldarsi per diversi minuti per raggiungere il punto più luminoso.
2. I microscopi a fluorescenza a trasmissione richiedono l'installazione del filtro di eccitazione richiesto tra la sorgente luminosa e il condensatore e il corrispondente filtro di blocco dietro la lente dell'obiettivo. I microscopi a epifluorescenza devono inserire il filtro di eccitazione/il divisore di fascio a due colori/l'inserto del filtro di blocco richiesto nella fessura del percorso ottico.
3. Utilizzare un microscopio a basso ingrandimento per osservare e regolare il centro della sorgente luminosa in base ai dispositivi di regolazione di diversi modelli di microscopi a fluorescenza in modo che si trovi al centro dell'intero punto di illuminazione.
4. Posizionare il campione e regolare la messa a fuoco per osservare. Si prega di prestare attenzione durante l'uso: non osservare il filtro direttamente con gli occhi per evitare danni agli occhi; quando si osserva il campione con una lente ad olio, è necessario utilizzare una speciale lente ad olio non fluorescente; la lampada al mercurio ad alta pressione non può essere riaperta immediatamente dopo lo spegnimento. Può essere riavviato dopo 5 minuti, altrimenti sarà instabile e influenzerà la durata della lampada al mercurio.
(3) Osservare al microscopio a fluorescenza sulla piattaforma didattica utilizzando un filtro per luce blu-viola. Si vede che il passaggio è o. Nelle cellule colorate con colorante fluorescente arancio di acridina allo 01%, il nucleo e il citoplasma sono eccitati per produrre due diversi colori di fluorescenza (verde scuro e rosso-arancio).
