La struttura speciale di un microscopio a fluorescenza comprende:
(I) Sistema di filtri colorati
Il filtro colorato è una parte importante del microscopio a fluorescenza, i suoi componenti principali sono il filtro della luce di eccitazione (primo filtro barriera), il filtro della luce di emissione (secondo filtro barriera) e la composizione semitrasparente e metà antifiltro (specchio divisore del fascio) . Vari produttori di modelli di filtri colorati, il nome spesso non è uniforme.
1. Filtro della luce di eccitazione e filtro della luce di emissione: in base alla sorgente luminosa e alle caratteristiche del fluorocromo, solitamente scegliere i seguenti tre tipi di abbinamento, per fornire un determinato intervallo di lunghezze d'onda della luce di eccitazione e rendere l'eccitazione del campione di fluorescenza attraverso l'oculare all'immagine.
Eccitazione UV: Il filtro della luce di eccitazione consente la trasmissione della luce UV e blocca il passaggio della luce visibile sopra i 400 nm. Il corrispondente filtro di emissione consente il passaggio della luce blu, che appare blu nel campo visivo, ad es. durante la colorazione DAPI.
Eccitazione della luce blu: il filtro della luce di eccitazione consente il passaggio della luce blu, bloccando altre lunghezze d'onda della luce. Il corrispondente filtro di emissione consente il passaggio della luce verde, ad esempio per i marcatori di colorazione GFP.
Eccitazione verde: il filtro di eccitazione consente il passaggio della luce verde, bloccando altre lunghezze d'onda. Il filtro di emissione corrispondente di solito lascia passare la luce rossa, ad esempio la colorazione con rodamina.
2. Filtro semitrasparente e semiriflettente: il suo ruolo è quello di bloccare completamente l'eccitazione della luce attraverso la riflessione; e attraverso il corrispondente intervallo di lunghezze d'onda della luce emessa. Il suo modello e l'eccitazione dei filtri luminosi e l'emissione dei filtri luminosi corrispondono a.
(B) lente dell'obiettivo e oculare
È possibile applicare una varietà di lenti obiettivo, ma * buona scelta di lenti obiettivo simmetriche e acromatiche, a causa della sua autofluorescenza molto piccola e delle proprietà di trasmissione della luce (gamma di lunghezze d'onda) adatte alla fluorescenza. Poiché la luminosità della fluorescenza dell'immagine nel campo visivo del microscopio è proporzionale al quadrato della velocità iniziale dell'obiettivo e inversamente proporzionale al suo ingrandimento, per migliorare la luminosità dell'immagine in fluorescenza, l'obiettivo con una velocità iniziale elevata dovrebbe essere usato. Soprattutto perché la fluorescenza non è sufficientemente forte, i campioni dovrebbero utilizzare un obiettivo con una velocità di bocca ampia e un'elevata trasmissione della luce, con il livello più basso possibile con l'oculare.
(C) altri dispositivi ottici
Riflettore, il suo strato riflettente è generalmente rivestito in alluminio, poiché l'alluminio assorbe meno la luce visibile e ultravioletta della regione blu-viola, riflettendo fino al 90% o più (mentre la riflettività dell'argento è solo del 70%). Generalmente vengono utilizzati riflettori piatti. Specchio per faretto, progettato e realizzato appositamente per la microscopia a fluorescenza. Specchio per faretto in vetro di quarzo o altro vetro trasparente ai raggi UV. Dispositivo a luce cadente, che oltre alla funzione di sorgente luminosa trasmessa, è più adatto per campioni opachi e traslucidi, come film spesso, membrana filtrante, colonie, colture di tessuti e altri campioni per l'osservazione diretta. Negli ultimi anni, lo sviluppo di un nuovo tipo di microscopio a fluorescenza che utilizza un dispositivo a luce cadente, chiamato microscopio a fluorescenza a caduta.
(D) sorgente luminosa
Oggi come sorgente luminosa viene utilizzata una lampada al mercurio ad alta pressione da 50 o 100 W. Durante la scarica dei due elettrodi, causata dall'evaporazione del mercurio, la pressione dell'aria aumenta rapidamente (questo processo richiede generalmente circa 5 ~ 15 minuti) e, nel processo di emissione dei quanti di luce, la lunghezza d'onda della luce rilasciata è sufficiente per eccitare tutti i tipi di sostanze fluorescenti, quindi, per la microscopia a fluorescenza vengono comunemente utilizzati.
Le lampade al mercurio hanno una durata di servizio relativamente breve, solitamente 200 ore, e in risposta a questa limitazione della durata di servizio, negli ultimi anni, una nuova sorgente luminosa fluorescente, X-Cite, è stata ampiamente utilizzata per la sua lunga durata della lampada di 2000 ore e il suo utilizzo flessibile - non è richiesto alcun preriscaldamento ed è pronto per essere utilizzato appena estratto dalla scatola.
