Il principio e le caratteristiche strutturali del microscopio a fluorescenza
La microscopia a fluorescenza utilizza un punto con un'elevata efficienza luminosa per emettere luce di una certa lunghezza d'onda (come luce ultravioletta 3650 pollici o luce blu viola 4200 pollici) attraverso il sistema di filtri come luce di eccitazione per eccitare le sostanze fluorescenti nel campione per emettere fluorescenza di vari colori Successivamente, osserva attraverso l'ingrandimento della lente dell'obiettivo e dell'oculare. In questo modo, sotto uno sfondo a forte contrasto, anche se la fluorescenza è molto debole, è facile da identificare e ha un'elevata sensibilità. Viene utilizzato principalmente per la ricerca della struttura e della funzione delle cellule e della composizione chimica. La struttura base di un microscopio a fluorescenza è composta da un normale microscopio ottico più alcuni accessori (come una sorgente di luce fluorescente, un filtro di eccitazione, un divisore di fascio bicolore e un filtro di blocco, ecc.). Sorgente di luce fluorescente: generalmente utilizza una lampada al mercurio ad altissima pressione (50-200 W), che può emettere luce di varie lunghezze d'onda, ma ogni sostanza fluorescente ha una lunghezza d'onda di eccitazione che produce la fluorescenza più forte, quindi un filtro di eccitazione (generalmente, ci sono filtri di eccitazione ultravioletti, viola, blu e verdi), che consentono solo alla luce di eccitazione di una certa lunghezza d'onda di passare attraverso e irradiare il campione, mentre assorbono altra luce. Dopo che ogni sostanza è stata irradiata dalla luce di eccitazione, emette una fluorescenza visibile con una lunghezza d'onda maggiore rispetto alla lunghezza d'onda dell'irradiazione in un tempo molto breve. La fluorescenza è specifica e generalmente più debole della luce di eccitazione. Per osservare una fluorescenza specifica, il blocco (o la soppressione) deve essere aggiunto dietro la lente dell'obiettivo e utilizzato in combinazione con esso.
La differenza tra microscopio a fluorescenza e microscopio ordinario
1. Il metodo di illuminazione è solitamente episcopico, ovvero la sorgente luminosa viene proiettata sul campione attraverso la lente dell'obiettivo;
2. La sorgente luminosa è la luce ultravioletta, la lunghezza d'onda è più corta e la risoluzione è superiore a quella dei normali microscopi;
3. Esistono due filtri speciali, quello davanti alla sorgente luminosa viene utilizzato per filtrare la luce visibile e quello tra l'oculare e l'obiettivo viene utilizzato per filtrare i raggi ultravioletti per proteggere l'occhio umano.
Il microscopio a fluorescenza è anche una specie di microscopio ottico, la differenza principale è che la lunghezza d'onda di eccitazione dei due è diversa. Ciò determina la differenza tra il microscopio a fluorescenza e il normale microscopio ottico in termini di struttura e utilizzo.
La microscopia a fluorescenza è uno strumento essenziale nella citochimica immunofluorescente. È composto da componenti principali come sorgente luminosa, sistema di piastre filtranti e sistema ottico. Consiste nell'utilizzare una certa lunghezza d'onda della luce per eccitare il campione affinché emetta fluorescenza e per osservare l'immagine fluorescente del campione amplificando la lente dell'obiettivo e il sistema dell'oculare.
