La differenza tra microscopio confocale laser e microscopio ottico tradizionale
La microscopia a fluorescenza confocale a scansione laser è uno strumento di analisi di biologia molecolare e cellulare relativamente avanzato che utilizza computer, laser e tecnologia di elaborazione delle immagini per ottenere dati tridimensionali di campioni biologici. Viene utilizzato principalmente per osservare la struttura delle cellule viventi e i cambiamenti biologici di molecole e ioni specifici, analisi quantitative e determinazione quantitativa in tempo reale.
Il principio della microscopia confocale laser: utilizzare il foro stenopeico di illuminazione posizionato dietro la sorgente luminosa e il foro stenopeico di rilevamento posizionato davanti al rilevatore per realizzare l'illuminazione puntiforme e il rilevamento puntiforme. La luce emessa dalla sorgente luminosa attraverso il foro stenopeico di illuminazione viene focalizzata su un punto sul piano focale del campione e la fluorescenza emessa da questo punto viene riprodotta sul foro stenopeico di rilevamento e qualsiasi luce emessa al di fuori di questo punto viene bloccata dal foro di rilevamento stenopeico. Il foro stenopeico di illuminazione e il foro stenopeico di rilevamento sono coniugati al punto irradiato o al punto rilevato, quindi il punto rilevato è il punto confocale e il piano in cui si trova il punto rilevato è il piano confocale.
Il computer visualizza i punti rilevati sullo schermo del computer sotto forma di punti immagine. Per generare un'immagine completa, il sistema di scansione nel percorso ottico esegue la scansione sul piano focale del campione per generare un'immagine confocale completa. Finché il tavolino si sposta su e giù lungo l'asse Z, un nuovo strato del campione viene spostato sul piano confocale e il nuovo strato del campione viene ripreso sul monitor. Con il movimento continuo dell'asse Z si possono ottenere immagini continue di diversi strati del campione. Immagine tagliata chiara.
La differenza tra i tradizionali microscopi ottici
I tradizionali microscopi a fluorescenza hanno un difetto insormontabile: le strutture fluorescenti al di fuori del piano focale sono sfocate e sfocate. Il motivo è che la maggior parte dei campioni biologici ha strutture sovrapposte. Se le strutture etichettate in modo fluorescente sono distribuite a diversi livelli e si sovrappongono, anche la fluorescenza diffusa dall'alto o dal basso del piano focale viene ricevuta dalla lente dell'obiettivo e la risoluzione del microscopio a fluorescenza sarà notevolmente migliorata. ridurre.
Sulla base dei microscopi ottici tradizionali, i microscopi confocali a scansione laser utilizzano la luce laser come sorgente luminosa, adottano il principio e il dispositivo della messa a fuoco coniugata e utilizzano i computer per eseguire l'elaborazione digitale delle immagini, l'osservazione, l'analisi e l'output degli oggetti osservati. Il campione può essere scansionato tomograficamente e ripreso per l'osservazione e l'analisi non distruttive della struttura spaziale tridimensionale delle cellule. Allo stesso tempo, utilizzando l'etichettatura immunofluorescente e le sonde di etichettatura fluorescente ionica, questa tecnologia può non solo osservare cellule fisse e sezioni di tessuto, ma anche eseguire l'osservazione e il rilevamento dinamici in tempo reale della struttura, delle molecole, degli ioni e delle attività vitali delle cellule viventi, a livello subcellulare L'osservazione di segnali fisiologici come Ca2 plus, valore di pH, potenziale di membrana e cambiamenti nella morfologia cellulare, è diventata una nuova generazione di potenti strumenti di ricerca nei campi della morfologia, della biologia cellulare molecolare, delle neuroscienze, della farmacologia e della genetica.
