Struttura e principali componenti di un microscopio a fluorescenza
La microscopia a fluorescenza è uno strumento essenziale nella citochimica immunofluorescente. È composto da componenti principali come sorgente luminosa, sistema di piastre filtranti e sistema ottico. Consiste nell'utilizzare una certa lunghezza d'onda della luce per eccitare il campione affinché emetta fluorescenza e per osservare l'immagine fluorescente del campione amplificando la lente dell'obiettivo e il sistema dell'oculare.
Struttura e principali componenti di un microscopio a fluorescenza
(1) Sorgente luminosa
Al giorno d'oggi, le lampade al mercurio ad altissima pressione da 200 W sono spesso utilizzate come sorgenti luminose. Sono fatti di vetro al quarzo, con una forma sferica al centro, e una certa quantità di mercurio è riempita all'interno. Durante il lavoro, la scarica tra i due elettrodi fa evaporare il mercurio e la pressione dell'aria nella sfera aumenta rapidamente. Quando il mercurio è completamente evaporato, può raggiungere la 50-70 pressione atmosferica standard e questo processo generalmente richiede circa 5-15 minuti. La luminescenza della lampada al mercurio ad altissima pressione è il risultato dell'emissione di quanti di luce durante la continua dissociazione e riduzione delle molecole di mercurio mediante la scarica tra gli elettrodi. Emette una forte luce ultravioletta e blu-viola, che è sufficiente per eccitare varie sostanze fluorescenti, quindi è ampiamente utilizzata nella microscopia a fluorescenza.
Anche le lampade al mercurio ad altissima pressione emettono molto calore. Pertanto, l'alloggiamento della lampada deve avere buone condizioni di dissipazione del calore e la temperatura dell'ambiente di lavoro non deve essere troppo elevata.
La nuova lampada al mercurio ad altissima pressione può essere accesa senza alta tensione all'inizio dell'uso. Dopo un periodo di utilizzo, deve essere avviato ad alta tensione (circa 15000V). Dopo l'avvio, la tensione operativa di mantenimento è generalmente 50-60V e la corrente operativa è di circa 4 A. La durata media di una lampada al mercurio ad altissima pressione da 200 W è di circa 200 ore se viene utilizzata per 2 ore ogni volta. Minore è l'orario di lavoro, minore è la durata della vita. Se viene utilizzato solo per 20 minuti, la durata della vita sarà ridotta del 50%. Pertanto, ridurre al minimo il numero di avvii quando lo si utilizza. Durante l'utilizzo della lampadina, la sua efficacia luminosa si riduce progressivamente. Dopo che la luce si è spenta, attendere che si raffreddi prima di riavviare. Non spegnere la lampadina subito dopo averla accesa, per non danneggiare l'elettrodo a causa dell'evaporazione incompleta del mercurio. In genere, è necessario attendere 15 minuti. A causa dell'elevata pressione della lampada al mercurio ad altissima pressione e dei forti raggi ultravioletti, la lampadina deve essere posizionata nella camera della lampada prima che possa essere accesa, in modo da non danneggiare gli occhi e causare il funzionamento in caso di esplosione .
Il circuito della sorgente luminosa della lampada al mercurio ad altissima pressione (100W o 200W) e diverse parti tra cui trasformatore, alimentatore e accensione. È presente un sistema per la regolazione del centro luminoso della lampadina nel vano lampada. Un riflettore concavo placcato in alluminio è installato dietro la lampadina e una lente di raccolta della luce è installata nella parte anteriore.
La lampada domestica al mercurio ad altissima pressione GCQ-200 ha buone prestazioni e può sostituire le lampadine importate come HBO-200. La durata media è di oltre 200 ore e il prezzo è relativamente basso.
Un dispositivo semplice e portatile con sorgente luminosa fluorescente al bromo e tungsteno ad alta temperatura di colore sviluppato nel mio paese ha dimensioni ridotte, peso leggero, bassa potenza, CA e CC a doppio uso (con alimentazione CC), facile da trasportare, facile da usare e ha stato reso popolare e applicato.
(2) Sistema di filtri colore
Il sistema di filtri colorati è una parte importante del microscopio a fluorescenza, che consiste in una piastra filtrante di eccitazione e una piastra filtrante pressante. Il modello della piastra filtrante e il nome di ciascun produttore spesso non sono uniformi. Le piastre filtranti prendono generalmente il nome dal colore di base, le lettere davanti rappresentano il colore, le lettere dietro rappresentano il vetro ei numeri rappresentano le caratteristiche del modello. microscopio Olimpo
(3) Lente dell'obiettivo
È possibile utilizzare vari obiettivi, ma vengono utilizzati obiettivi acromatici perché la loro autofluorescenza è minima e le loro proprietà di trasmissione della luce (intervallo di lunghezze d'onda) sono adatte alla fluorescenza. Poiché la luminosità della fluorescenza dell'immagine nel campo visivo del microscopio è proporzionale al quadrato del rapporto di apertura della lente dell'obiettivo e inversamente proporzionale al suo ingrandimento, al fine di migliorare la luminosità dell'immagine della fluorescenza, una lente dell'obiettivo con una grande dovrebbe essere usato il rapporto di apertura. Soprattutto ad alto ingrandimento il suo effetto è molto evidente. Pertanto, per i campioni con fluorescenza insufficiente, è necessario utilizzare una lente dell'obiettivo con un ampio rapporto di apertura con un oculare il più basso possibile (4×, 5×, 6,3×, ecc.).
(4) Specchio
Lo strato riflettente del riflettore è generalmente placcato in alluminio, poiché l'alluminio assorbe meno nella regione blu-viola della luce ultravioletta e della luce visibile e il riflesso è superiore al 90 percento, mentre il riflesso dell'argento è solo del 70 percento. Generalmente viene utilizzato un riflettore piatto.
(5) Condensatore
I condensatori progettati per la microscopia a fluorescenza sono realizzati in vetro di quarzo o altro vetro trasparente ai raggi UV. Esistono due tipi di condensatori di campo chiaro e condensatori di campo oscuro. Esistono anche concentratori di fluorescenza a contrasto di fase.
(6) Dispositivo Epi-luce
Il nuovo tipo di dispositivo epi-light consiste nel fatto che dopo che la luce proveniente dalla sorgente luminosa colpisce il filtro spettroscopico di interferenza, la parte a lunghezza d'onda corta (ultravioletto e blu porpora) viene riflessa a causa delle proprietà del rivestimento sul filtro. Quando il filtro è rivolto verso la sorgente luminosa, l'angolo è 45. Quando è inclinato, spara verticalmente alla lente dell'obiettivo e spara al campione attraverso la lente dell'obiettivo, in modo che il campione sia eccitato. In questo momento, la lente dell'obiettivo funge direttamente da collettore di luce. Allo stesso tempo, la parte lunga del filtro (verde, giallo, rosso, ecc.) è trasparente al filtro, quindi non si riflette nella direzione della lente dell'obiettivo e il filtro funge da piastra del filtro di eccitazione, poiché la fluorescenza del campione si trova nella regione della lunghezza d'onda lunga della luce visibile, può passare attraverso il filtro e raggiungere l'oculare per l'osservazione, la luminosità dell'immagine fluorescente aumenta con l'aumento dell'ingrandimento ed è più forte della luce trasmessa sorgente ad alto ingrandimento. Oltre alla funzione di una sorgente luminosa di trasmissione, è più adatto per l'osservazione diretta di campioni opachi e traslucidi, come fette spesse, membrane filtranti, colonie e campioni di colture tissutali. I nuovi microscopi a fluorescenza sviluppati negli ultimi anni utilizzano per lo più dispositivi epi-luce, che sono chiamati microscopi epi-fluorescenza.
