Confocale microscopio è un epocale high-tech nuovo prodotto sviluppato in il 1980s, and it è uno di il importante analitico strumenti in molecolare biologia e vita scienza oggi. Confocale microscopia è basato su fluorescenza microscopio imaging con a laser scansione dispositivo aggiunto, using a computer per immagine elaborazione a ottenere fluorescente immagini di il microstruttura interno cellule o tessuti, e a osservare cambiamenti in il morfologia di molti fisiologici segnali macchine a il subcellulare livello. Diventare a potente ricerca strumento in il campi di morfologia, molecolare cellulare biologia, neuroscienze, farmacologia, genetica e altro scientifico campi.
Campione preparazione per confocale microscopia è a critico passo precedente a rivelazione. Campioni bisogno a essere marcato con fluorescente sonde (singolo, doppio, triplo).
Specimens can be fixed or living tissues, or fixed or living adherent cultures. Cells should be cultured on Confocal special small culture dishes or coverslips. Suspend cells, shake or drop slices, and cover with coverslips cover film. The Zda thickness of the sample is about 1~2mm, the thickness of the cover glass used should be less than 0.17mm, and the thickness of the slide glass should be between 0.8~1.2mm, and the surface is smooth, the thickness is uniform, and there is no obvious interference fluorescence. Mounting medium is often used for fixed samples, and glycerol prepared in PBS with a pH of 8.5-9 is commonly used for mounting.
1. Selection of dyes
Since the confocal microscope uses a single-wavelength laser as the light source, the choice of fluorescent dyes should be based on the wavelength of the laser equipped with the confocal microscope. If there are multiple fluorescent dyes in the same sample, their emission wavelength should also be considered as much as possible. Do not overlap to avoid cross-color problems.
2. Selection of sample carrier
Generally, the high-power objective lens of confocal microscope is oil lens, its numerical aperture is small, and the working distance between the lens and the sample is required to be no more than 0.17mm. Slides and coverslips are fine. If it is suspended cells or suspended particles, a petri dish dedicated to a confocal microscope can be used to carry the sample for observation.
3. Selection of mounting medium
Se il campione solo bisogni di essere osservato una volta e il fluorescenza è non facilmente temprato, tu puoi scegliere a certo concentrazione di glicerolo miscela a sigillante il vetrino. Se il campione bisogni a essere posizionato per a periodo di tempo e preso multiplo volte, an anti-fluorescenza tempra montaggio medio dovrebbe essere selezionato a ridurre il perdita di fluorescente segnali.
