Principi, caratteristiche e uso della microscopia a fluorescenza
Il principio e le caratteristiche strutturali di un microscopio a fluorescenza: un microscopio a fluorescenza utilizza una sorgente luminosa puntiforme ad alta efficienza luminosa, che emette una determinata lunghezza d'onda della luce (come la luce ultravioletta 3650 pollici o la luce blu ultravioletta 4200 pollici) attraverso un sistema di filtraggio del colore come un luce di eccitazione. La sostanza fluorescente nel campione viene eccitata per emettere vari colori di fluorescenza e quindi osservata attraverso l'ingrandimento dell'obiettivo e dell'oculare. In questo modo, anche con una fluorescenza debole, è facilmente riconoscibile e altamente sensibile su sfondi a forte contrasto, utilizzato principalmente per studiare la struttura e la funzione cellulare, nonché la composizione chimica. La struttura di base di un microscopio a fluorescenza è composta da un normale microscopio ottico e da alcuni accessori (come una sorgente luminosa fluorescente, un filtro di eccitazione, un separatore di fascio bicromatico e un filtro di blocco, ecc.). Sorgenti luminose fluorescenti: solitamente utilizzano lampade al mercurio ad altissima pressione (50-200W), che possono emettere luce di varie lunghezze d'onda. Tuttavia, ciascuna sostanza fluorescente ha una lunghezza d'onda della luce di eccitazione che produce la fluorescenza più forte, quindi è necessario aggiungere filtri di eccitazione (solitamente filtri di eccitazione ultravioletti, viola, blu e verdi) per consentire solo a una determinata lunghezza d'onda della luce di eccitazione di passare attraverso e illuminare il campione, assorbendo tutta l'altra luce. Ogni sostanza, dopo essere stata irradiata dalla luce eccitata, emette in un periodo di tempo molto breve una fluorescenza visibile con una lunghezza d'onda maggiore dell'irradiazione. La fluorescenza ha specificità ed è generalmente più debole della luce di eccitazione. Per osservare la fluorescenza specifica, è necessario aggiungere un filtro bloccante (o soppressore) dietro la lente dell'obiettivo.
Ha due funzioni: in primo luogo, assorbe e impedisce alla luce di eccitazione di entrare nell'oculare per evitare di disturbare la fluorescenza e di danneggiare gli occhi; in secondo luogo, seleziona e lascia passare la fluorescenza specifica, visualizzando un colore di fluorescenza specifico. Entrambi i tipi di filtri devono essere selezionati per essere utilizzati insieme.
