Principi e caratteristiche strutturali del microscopio a fluorescenza
Il microscopio a fluorescenza utilizza una sorgente di luce puntuale altamente efficiente per emettere una certa lunghezza d'onda della luce (come la luce ultravioletta 3650 o la luce blu viola 4200) attraverso un sistema di filtro a colori come luce di eccitazione, che eccita le sostanze fluorescenti nel campione per emettere vari colori di fluorescenza, e quindi osserva attraverso la magnificazione del lens e dell'occhio obiettivo. In questo modo, anche con fluorescenza debole in un background forte, è facile da riconoscere e ha un'alta sensibilità. È usato principalmente per lo studio della struttura cellulare, della funzione e della composizione chimica. La struttura di base di un microscopio a fluorescenza è composta da un normale microscopio ottico e alcuni accessori come una sorgente di luce fluorescente, filtro di eccitazione, splitter a doppio colore e filtro bloccante. La sorgente di luce fluorescente - di solito utilizza lampade al mercurio a pressione ad altissima pressione (50-200 W), che può emettere luce di varie lunghezze d'onda, ma ogni sostanza fluorescente ha una lunghezza d'onda della luce di eccitazione che produce una forte fluorescenza. Pertanto, i filtri di eccitazione (di solito filtri ultravioletti, viola, blu e verdi) devono essere aggiunti per consentire solo una certa lunghezza d'onda della luce di eccitazione di passare attraverso e irradiare il campione, assorbendo tutta la luce. Dopo essere stata irradiata con la luce di eccitazione, ogni sostanza emette fluorescenza visibile con una lunghezza d'onda più lunga della lunghezza d'onda di irradiazione in un periodo di tempo molto breve. La fluorescenza ha specificità ed è generalmente più debole della luce di eccitazione. Al fine di osservare una fluorescenza specifica, è necessario aggiungere un filtro bloccante (o soppressione) dietro l'obiettivo. Le sue funzioni sono duplici: in primo luogo, per assorbire e bloccare la luce di eccitazione dall'entrare nell'oculare per evitare di disturbare la fluorescenza e danneggiare gli occhi; In secondo luogo, per selezionare e consentire il passaggio di fluorescenza specifica, esibendo un colore fluorescente specifico. Due tipi di filtri devono essere utilizzati in combinazione.
