Esame preliminare e regolazione della microscopia a fluorescenza:
(1) Prima di ogni osservazione in fluorescenza, è necessario controllare regolarmente l'allineamento del filamento, la messa a fuoco del percorso ottico, l'apertura dell'apertura e le impostazioni dell'apertura del campo visivo del dispositivo a fluorescenza.
(2) Se i componenti richiesti del filtro di eccitazione/emissione della fluorescenza sono installati nel convertitore, se l'obiettivo del microscopio a fluorescenza è configurato correttamente e se le macchie di olio e polvere davanti alla lente dell'obiettivo sono state rimosse.
(3) Allo stesso modo, quando si osserva la differenza nella luce trasmessa, è necessario controllare la coniugazione della lente di focalizzazione con il centro e l'anello di contrasto con la lente dell'obiettivo.
(4) Controllare se sul portacampione (vetrino, vetro di copertura e altri contenitori) pendono liquidi o polvere e se lo spessore rientra nell'intervallo della distanza di lavoro calibrata dalla lente dell'obiettivo. I campioni affettati non devono essere troppo spessi, si consiglia circa inferiore o uguale a 10 μm.
(5) A causa della presenza di raggi ultravioletti nella fonte di illuminazione, sopra la piattaforma di carico deve essere posizionato un parasole marrone per evitare danni UV alla retina.
(6) La tensione instabile può ridurre la durata delle lampade al mercurio ad alta tensione e è necessario aggiungere un regolatore di tensione all'alimentazione della sorgente luminosa.
(7) Per prolungare la durata della lampada al mercurio, è possibile spegnerla solo 15 minuti dopo l'accensione; Una volta spenta l'alimentazione fluorescente della lampada al mercurio, è necessario attendere almeno 10 minuti per raffreddare i vapori di mercurio al suo stato originale quando viene riavviata, altrimenti ciò influirà sulla durata della lampada.
Osservazione delle immagini al microscopio a fluorescenza:
(1) Dopo aver acceso la sorgente della lampada fluorescente per circa 5-10 minuti, l'intensità di eccitazione tende a stabilizzarsi e il campione viene caricato per l'osservazione; Per evitare che un'eccessiva eccitazione della luce durante la messa a fuoco e la ricerca delle immagini causi l'attenuazione della fluorescenza del campione, l'apertura del microscopio a fluorescenza viene prima ridotta o viene aggiunto un filtro ND per regolare l'eccitazione su un'intensità moderata, quindi il piano del campione viene spostato regolarmente. Dopo aver determinato l'immagine speculare, questa viene regolata allo stato di fluorescenza per la registrazione.
(2) Regolazioni con scarsa qualità dell'immagine. Le necessarie misure di aggiustamento che possono essere adottate, esclusi i fattori di preparazione del campione, sono:
① Escludere dispositivi di ombreggiatura o limitazione nel percorso ottico dell'imaging, come accessori DIC, filtri ND, ecc.
② Regolare nuovamente la messa a fuoco e l'apertura dell'apertura del collettore del microscopio a fluorescenza.
③ Regolare con attenzione l'anello di correzione della copertura dell'obiettivo del microscopio a fluorescenza.
