PH meter - Determinazione e regolazione del pH medio
Tutti i microrganismi sono influenzati dal pH dell'ambiente in cui vivono. Spesso la presenza di specie selettive restringe l'intervallo di pH in cui crescono. A volte, anche l'acidità o l'alcalinità del terreno possono fungere da fattore di selezione della crescita. Per i terreni di test biochimici, tuttavia, l'intervallo di pH in cui i microrganismi presentano attività tk nel substrato è più ristretto dell'intervallo di pH richiesto per la crescita: pertanto, è importante regolare il pH dei terreni all'intervallo previsto. Quando il laboratorio prepara il terreno in base alla composizione del terreno, il pH deve essere controllato e regolato. Va sottolineato che anche per il mezzo disidratato sintetico già pronto fornito dal produttore (soprattutto per alcuni mezzi disidratati di scorta), il pH finale deve essere misurato dopo aver realizzato il mezzo sperimentale.
Il modo più accurato per misurare il pH di un mezzo è con un pHmetro. Prima dell'uso, deve essere calibrato con una soluzione tampone standard di pH noto (normalmente il pH è compreso tra 4 e 7). Sciacquare l'elettrodo del pHmetro con acqua distillata e immergerlo nel mezzo di coltura nel bicchiere, quindi leggere il pH del mezzo di coltura dalla scala del pHmetro. Ogni produttore fornisce istruzioni operative dettagliate per ogni tipo di pHmetro.
Durante la preparazione del terreno di coltura, il pH può essere facilmente regolato utilizzando un pHmetro con agitazione meccanica. Il terreno di coltura deve essere preparato in un contenitore (come un bicchiere grande) che possa essere mescolato continuamente. o magneti avvolti in teflon. Il pH del terreno contenente l'agar deve essere regolato dopo lo scongelamento, operazione facilmente eseguibile con un agitatore magnetico riscaldabile. Quando si regola il pH, utilizzare prima una soluzione tampone standard di pH noto per calibrare il pHmetro. Quindi inserire l'elettrodo composito e il termometro a resistenza (se presente) nel mezzo, aggiungere lentamente una quantità appropriata di acido cloridrico e idrossido di sodio dall'estremità del bicchiere lontano dall'elettrodo, in modo che il mezzo possa raggiungere e mantenere il pH richiesto.
La compensazione della temperatura del pHmetro dovrebbe tenere conto dell'effetto della temperatura sul sistema di elettrodi: in alcune diluizioni e mezzi, il pH cambia considerevolmente con la temperatura. Per mezzi liquidi e diluizioni, il pH può solitamente essere regolato e misurato a 25 gradi o alla temperatura alla quale vengono utilizzati.
Il pH del mezzo di agar deve essere regolato dopo la dissoluzione e la temperatura di dissoluzione è superiore a 45 gradi: pertanto, il pH del mezzo solido deve essere determinato alla sua temperatura di utilizzo. A questo punto, dovrebbe essere utilizzato un elettrodo composito a testa piatta e la compensazione della temperatura del pHmetro dovrebbe essere calibrata manualmente. Quando si prepara il terreno di coltura, se si determina che il pH del terreno di coltura è diverso tra lo stato di fusione e lo stato di solidificazione, significa che c'è un errore nella regolazione del pH.
Allo stesso modo, quando il mezzo preparato viene sterilizzato a caldo (ad esempio, autoclavato), può anche subire variazioni di pH. Per il terreno disidratato, il produttore ha preso in considerazione questo aspetto e di solito non è necessario regolare il pH, ma il pH del terreno da utilizzare deve essere controllato attentamente. Se il pH del terreno agar disidratato deve essere regolato durante la ridissoluzione o la preparazione, è meglio regolarlo con acido cloridrico sterilizzato per filtro e soluzione di idrossido di sodio dopo la fase di sterilizzazione per evitare la formazione di surriscaldamento del terreno. Quando si preparano terreni con diverse materie prime o prodotti farmaceutici, il pH dei terreni deve essere controllato dopo la sterilizzazione in autoclave. Inoltre, se si riscontra che il pH del mezzo cambia allo stesso modo dopo ogni autoclave, il pH può essere regolato in modo appropriato durante la preparazione del mezzo. Tuttavia, è ancora necessario determinare il pH finale del terreno dopo la sterilizzazione.
