Misurazione della quantità microbica - Metodo di conteggio diretto microscopico!
La crescita delle popolazioni batteriche è caratterizzata da un aumento del numero di cellule o da un aumento del materiale cellulare. Esistono diversi metodi per misurare il numero di cellule, tra cui il conteggio microscopico diretto, il conteggio su piastra, la turbometria mediante spettrofotometro, il numero più probabile MPN e la filtrazione su membrana. I metodi per misurare le sostanze cellulari comprendono la misurazione del peso secco delle cellule, la misurazione del contenuto di alcuni componenti delle cellule come azoto, RNA e DNA e la misurazione dei prodotti metabolici. In sintesi, esistono molti metodi per misurare la crescita microbica, ciascuno con i propri vantaggi e svantaggi, e la selezione dovrebbe basarsi su requisiti specifici del lavoro. Questo esperimento introduce principalmente il metodo di conteggio diretto al microscopio comunemente utilizzato nella produzione e nel lavoro di ricerca scientifica.
Requisiti dello scopo
1. Chiarire il principio dell'utilizzo di una scheda per il conteggio delle cellule del sangue per il conteggio.
2. Padroneggiare il metodo di utilizzo di una scheda per il conteggio delle cellule del sangue per il conteggio microbico.
2, Principi fondamentali
Il metodo di conteggio diretto microscopico è un metodo semplice, veloce e intuitivo per contare direttamente una piccola quantità di sospensione di un campione al microscopio posizionandolo su uno speciale vetrino con una determinata area e volume (noto anche come contatore batterico). Attualmente, i dispositivi per la conta batterica comunemente usati in patria e all'estero includono piastre per la conta delle cellule del sangue, dispositivi per la conta batterica Peteroff Hauser e dispositivi per la conta batterica Hawksley, che possono essere tutti utilizzati per contare sospensioni di lieviti, batteri, spore fungine, ecc., con lo stesso principio di base. Gli ultimi due tipi di contatori batterici hanno un volume totale di {{0}},02 mm3 dopo essere stati coperti con un vetrino coprioggetto e la distanza tra il vetrino coprioggetto e il vetrino di trasporto è di soli 0,02 mm. Pertanto, un obiettivo a immersione in olio può essere utilizzato per osservare e contare cellule più piccole come i batteri. Oltre all'utilizzo di questi contatori batterici, esiste anche un metodo di stima per osservare direttamente al microscopio il rapporto tra l'area dello striscio e l'area del campo, che viene generalmente utilizzato per l'esame batteriologico del latte. I vantaggi del conteggio diretto con un microscopio sono intuitivi, veloci e facili da utilizzare. Ma lo svantaggio di questo metodo è che i risultati misurati sono solitamente la somma di cellule vive e morte. Allo stato attuale, ci sono alcuni metodi che possono superare questo inconveniente, come la combinazione di colture in camera di colorazione di cellule vive (breve tempo) e l'aggiunta di inibitori della divisione cellulare per raggiungere l'obiettivo di contare solo le cellule vive.
Utilizzo di una tavola per il conteggio delle cellule del sangue come esempio di conteggio diretto al microscopio. Le modalità di utilizzo degli altri due contabatteri sono reperibili nei manuali dei vari produttori. Il conteggio diretto al microscopio utilizzando una piastra per il conteggio delle cellule del sangue è un metodo comunemente utilizzato per la conta microbica. Il piano di conteggio è un vetrino in vetro appositamente realizzato con quattro scanalature che formano tre piattaforme su di esso; La piattaforma più ampia al centro è divisa in due metà da una breve scanalatura orizzontale e su ciascun lato della piattaforma è presente una griglia. Ogni griglia è divisa in nove grandi griglie e la griglia grande al centro è la stanza del conteggio. La struttura della piastra per il conteggio delle cellule del sangue è mostrata nella Figura l{{0}}. La scala della sala di conteggio ha generalmente due specifiche. Il primo è che un quadrato grande è diviso in 25 quadrati medi, e ogni quadrato è ulteriormente diviso in 16 quadrati piccoli (Figura 15-2); Un altro metodo consiste nel dividere un quadrato grande in 16 quadrati medi, e ogni quadrato è ulteriormente diviso in 25 quadrati piccoli. Tuttavia, indipendentemente dalle dimensioni del tabellone di conteggio, ci sono 400 quadrati piccoli in ogni quadrato grande. Se la lunghezza del lato di ciascun quadrato è 1 mm, l'area di ciascun quadrato grande è 1 mm2. Dopo aver coperto con un vetrino coprioggetto, l'altezza tra il vetrino coprioggetto e il vetrino è 0,1 mm, quindi il volume della camera di conteggio è 0,1 mm3 (un millesimo di millilitro). Figura 15-1 Struttura della scheda per il conteggio delle cellule del sangue (I) Figura 15-2 Struttura della scheda per il conteggio delle cellule del sangue (II) A Vista frontale; B. Vista in sezione verticale; La griglia ingrandita ha un grande quadrato al centro che funge da sala di conteggio 1. Pannello per il conteggio delle cellule del sangue; 2. Vetro di copertura; Nella conta in sala conta, la carica batterica totale viene solitamente calcolata per cinque quadrati, poi si ottiene il valore medio di ogni quadrato, moltiplicato per 25 o 16 per ottenere la carica batterica totale in un quadrato grande, che viene poi convertito nel valore conta batterica totale nella soluzione batterica lml. Supponendo che la conta batterica totale in cinque griglie quadrate sia A e che il fattore di diluizione della soluzione batterica sia B. Se nella griglia quadrata sono presenti 25 piastre di conteggio, la conta batterica totale in 1 ml di soluzione batterica è A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Allo stesso modo, se ci sono 16 piastre di conteggio nella griglia quadrata, la conta batterica totale in 1 ml di soluzione batterica è A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
