Introduzione ai vantaggi migliorati della microscopia multifotonica a scansione laser
Il microscopio multifotonico a scansione laser è un significativo miglioramento della microscopia ottica, manifestato principalmente nella capacità di osservare strutture profonde di cellule viventi, cellule fisse e tessuti e ottenere strutture chiare e acute del piano z, vale a dire fette ottiche, che possono essere usate per costruire strutture solide tridimensionali. Il microscopio confocale utilizza una sorgente di luce laser, che viene ampliata per riempire l'intero piano focale della lente oggettiva, e quindi convertito in punti molto piccoli sul piano focale del campione attraverso il sistema lente della lente oggettiva. Secondo l'apertura numerica della lente oggettiva, il diametro del punto di illuminazione luminoso è circa 0. 25-0. 8 μ m e la profondità è circa 0. 5-1. 5 μ m. La dimensione del punto confocale è determinata dalla progettazione del microscopio, dalla lunghezza d'onda laser, dalle caratteristiche oggettive, dalle impostazioni dello stato dell'unità di scansione e dalle proprietà dei campioni. La gamma di illuminazione e la profondità di un microscopio da campo sono grandi, mentre l'illuminazione di un microscopio confocale si concentra su un punto focale sul piano focale. Il vantaggio di base della microscopia confocale è che può eseguire sezionamento ottico fine su campioni fluorescenti spessi (fino a 5 0 μ m o più), con uno spessore da circa 0,5 a 1,5 μ m. La serie di immagini a fessura ottica può essere ottenuta spostando il campione su e giù usando il motore Stepper dell'asse Z del microscopio. La raccolta delle informazioni sull'immagine è controllata all'interno del piano * *, senza interferenze dai segnali emessi da altre posizioni sul campione. Dopo aver rimosso l'influenza della fluorescenza di fondo e aumentando il rapporto segnale-rumore, il contrasto e la risoluzione delle immagini confocali sono significativamente migliorate rispetto alle tradizionali immagini di fluorescenza dell'illuminazione sul campo. In molti esemplari, i componenti strutturali intricati si intrecciano per formare sistemi complessi, ma una volta possono essere raccolti abbastanza sezioni ottiche, possiamo usare il software per ricostruirli in tre dimensioni. Questo metodo sperimentale è stato ampiamente utilizzato nella ricerca biologica per chiarire le complesse relazioni strutturali e funzionali tra cellule o tessuti.
