Introduzione ai vantaggi e agli svantaggi della microscopia a scansione laser multifotone
1. Utilizzando la luce rossa o infrarossa per eccitare, la diffusione della luce è piccola e la diffusione di piccole particelle è inversamente proporzionale alla quarta potenza della lunghezza d'onda.
2. È possibile raccogliere più fotoni sparsi dalla sezione trasversale dell'immagine senza la necessità di fori stenopeici.
3. Il foro stenopeico non è in grado di distinguere i fotoni sparsi emessi dall'area sfocata o dall'area di messa a fuoco e il rapporto segnale-rumore dell'imaging multi-fotone negli strati profondi è buono.
4. La luce ultravioletta o visibile utilizzata per l'eccitazione del singolo fotone viene facilmente assorbita e attenuata dal campione prima che il raggio raggiunga il piano focale ed è difficile eccitare gli strati profondi.
5. In termini di osservazione al microscopio biologico, la prima considerazione è non danneggiare lo stato attivo dell'organismo stesso e mantenere il flusso di acqua, la concentrazione di ioni, ossigeno e sostanze nutritive. Nel caso dell'osservazione della luce, sia il calore che l'energia dei fotoni devono rimanere entro la quantità di irradiazione e l'energia luminosa affinché le cellule non vengano danneggiate.
6. La microscopia multifotone presenta molti vantaggi. Come la risoluzione tridimensionale, la penetrazione in profondità, l'efficienza di diffusione, la luce di fondo, il rapporto segnale-rumore, il controllo, ecc., hanno tutte caratteristiche che i precedenti microscopi laser non avevano o con cui non potevano essere confrontate.
Svantaggi della microscopia a scansione laser multifotone:
1. Può solo visualizzare la fluorescenza.
2. Se il campione contiene cromofori che assorbono la luce di eccitazione, il campione potrebbe essere danneggiato termicamente.
3. La risoluzione è leggermente ridotta. Sebbene possa essere migliorato utilizzando contemporaneamente i fori confocali, si verifica una perdita di segnale.
4. Limitato dai costosi laser ultraveloci, il costo dei microscopi a scansione multifotone è relativamente elevato.
