Introduzione alla microscopia a scansione laser multifotone: vantaggi e svantaggi
1. Eccitata dalla luce rossa o infrarossa, la diffusione della luce è piccola e la diffusione di piccole particelle è inversamente proporzionale alla quarta potenza della lunghezza d'onda.
2. È possibile raccogliere più fotoni sparsi dalla sezione trasversale dell'immagine senza la necessità di fori stenopeici.
3. I fori stenopeici non sono in grado di distinguere i fotoni sparsi emessi da aree sfocate o focali e i multifotoni hanno un migliore rapporto segnale-rumore nell'imaging profondo.
4. La luce ultravioletta o visibile utilizzata per l'eccitazione del singolo fotone viene facilmente assorbita e attenuata dal campione prima che il raggio raggiunga il piano focale, rendendo difficile l'eccitazione degli strati profondi.
5. In termini di osservazione al microscopio biologico, la prima considerazione è non danneggiare lo stato attivo dell'organismo stesso, mantenere la circolazione dell'acqua, la concentrazione di ioni, l'ossigeno e le sostanze nutritive. Nel campo dell'osservazione della luce, sia l'energia termica che quella dei fotoni devono rimanere entro la dose di irradiazione e l'energia luminosa che non danneggia le cellule.
6. La microscopia multifotone presenta molti vantaggi. In termini di risoluzione tridimensionale, invasione in profondità, efficienza di diffusione, luce di fondo, rapporto segnale-rumore, controllo, ecc., ci sono caratteristiche che i microscopi laser precedenti non possiedono o non possono superare
Svantaggi del microscopio a scansione laser multifotone:
1. Solo per imaging in fluorescenza.
2. Se il campione include cromofori in grado di assorbire la luce di eccitazione, il campione potrebbe essere soggetto a danni termici.
3. La risoluzione è leggermente ridotta, sebbene possa essere migliorata utilizzando contemporaneamente piccoli fori confocali, si verifica una perdita di segnale.
4. A causa delle limitazioni dei costosi laser ultraveloci, il costo dei microscopi a scansione multifotone è relativamente elevato.
