Introduzione alla scelta tra microscopi invertiti e microscopi a fluorescenza
Il microscopio è uno strumento importante nella coltura cellulare e nei relativi esperimenti sui derivati. Attualmente sul mercato sono disponibili diversi tipi di microscopi e scegliere un microscopio che soddisfi le esigenze e sia adatto è una sfida. Di seguito introdurremo i principi dei microscopi invertiti e dei microscopi a fluorescenza per una facile selezione.
La composizione di un microscopio invertito è la stessa di un microscopio normale, costituito principalmente da tre parti: parte meccanica, parte di illuminazione e parte ottica. La composizione di un microscopio invertito è la stessa di un normale microscopio verticale, tranne per il fatto che la lente dell'obiettivo e il sistema di illuminazione sono invertiti, con il primo sotto il tavolino e il secondo sopra il tavolino. Questa struttura consente un aumento significativo della distanza effettiva tra il sistema di messa a fuoco dell'illuminazione e il tavolino, rendendo più semplice il posizionamento di strumenti di osservazione più spessi come piastre di coltura e bottiglie di colture cellulari (ovviamente sono accettabili anche vetrini), mentre la distanza di lavoro tra la lente dell'obiettivo e il materiale non deve essere molto grande. Il microscopio invertito viene utilizzato da istituzioni mediche e sanitarie, università e istituti di ricerca per osservare microrganismi, cellule, batteri, colture di tessuti, sospensioni, sedimenti, ecc. Può osservare continuamente il processo di riproduzione e divisione cellulare e batterica nel mezzo di coltura e può catturare qualsiasi stato durante questo processo. Ampiamente usato in campi quali citologia, parassitologia, oncologia, immunologia, ingegneria genetica, microbiologia industriale, botanica, ecc.
La microscopia a fluorescenza viene utilizzata per studiare l'assorbimento, il trasporto, la distribuzione e la localizzazione delle sostanze all'interno delle cellule. Per l'oggetto testato, esistono due modi per generare fluorescenza: fluorescenza spontanea, che emette direttamente fluorescenza dopo l'irradiazione UV; La fluorescenza secondaria si verifica quando l'oggetto osservato viene trattato con coloranti fluorescenti e quindi irradiato con luce ultravioletta per emettere fluorescenza. Alcune sostanze nelle cellule, come la clorofilla, producono fluorescenza spontanea quando esposte alla radiazione ultravioletta; Alcune sostanze da sole non possono emettere fluorescenza, ma se colorate con coloranti fluorescenti o anticorpi fluorescenti, possono anche emettere fluorescenza secondaria dopo essere state irradiate con luce ultravioletta. Il microscopio a fluorescenza utilizza una sorgente luminosa puntiforme altamente efficiente per emettere una determinata lunghezza d'onda della luce (luce ultravioletta 365 nm o luce blu viola 420 nm) attraverso un sistema di filtri colorati come luce di eccitazione, che eccita le sostanze fluorescenti all'interno del campione per emettere vari colori di fluorescenza, quindi osserva attraverso l'ingrandimento della lente dell'obiettivo e dell'oculare. In questo modo, anche con una fluorescenza debole su uno sfondo forte, è facile da riconoscere e ha un'elevata sensibilità. Viene utilizzato principalmente per lo studio della struttura, della funzione e della composizione chimica delle cellule.
