Come scegliere tra microscopio invertito e microscopio a fluorescenza?
Il microscopio è uno strumento importante nella coltura cellulare e nei relativi esperimenti sui derivati. Attualmente sul mercato sono disponibili diversi tipi di microscopi e scegliere un microscopio che soddisfi le esigenze e sia adatto è una sfida. Di seguito, introdurremo i principi dei microscopi invertiti e dei microscopi a fluorescenza affinché tutti possano scegliere.
Il microscopio invertito, come un normale microscopio, è costituito principalmente da tre parti: parte meccanica, parte luminosa e parte ottica. La composizione di un microscopio invertito è la stessa di un normale microscopio verticale, tranne per il fatto che la lente dell'obiettivo e il sistema di illuminazione sono invertiti, con il primo sotto il tavolino e il secondo sopra il tavolino. Questa struttura amplia notevolmente la distanza effettiva tra il sistema di faretti luminosi e il palco, facilitando il posizionamento di strumenti di osservazione più spessi come piastre di coltura e bottiglie di colture cellulari (ovviamente si possono utilizzare anche vetrini), mentre la distanza di lavoro tra il lente dell'obiettivo e il materiale non deve essere molto grande. Il microscopio invertito viene utilizzato da istituzioni mediche e sanitarie, università e istituti di ricerca per osservare microrganismi, cellule, batteri, colture di tessuti, sospensioni, sedimenti, ecc. Può osservare continuamente il processo di proliferazione e divisione cellulare e batterica nel mezzo di coltura e può catturare qualsiasi forma di questo processo. Ampiamente utilizzato in campi quali citologia, parassitologia, oncologia, immunologia, ingegneria genetica, microbiologia industriale e botanica.
La microscopia a fluorescenza viene utilizzata per studiare l'assorbimento, il trasporto, la distribuzione e la localizzazione delle sostanze all'interno delle cellule. Per l'oggetto testato, esistono due modi per generare fluorescenza: fluorescenza spontanea, che viene emessa direttamente dall'irradiazione ultravioletta; La fluorescenza secondaria si verifica quando l'oggetto osservato viene trattato con coloranti fluorescenti ed esposto alla luce ultravioletta prima di emettere fluorescenza. Alcune sostanze presenti nelle cellule, come la clorofilla, producono fluorescenza spontanea dopo essere state esposte alla radiazione ultravioletta; Alcune sostanze stesse potrebbero non emettere fluorescenza, ma se colorate con coloranti fluorescenti o anticorpi fluorescenti, possono anche emettere fluorescenza secondaria sotto la radiazione ultravioletta. Un microscopio a fluorescenza utilizza una sorgente luminosa puntiforme ad alta efficienza luminosa per emettere una determinata lunghezza d'onda della luce (UV 365 nm o UV blu 420 nm) attraverso un sistema di filtraggio del colore come luce di eccitazione, che eccita le sostanze fluorescenti nel campione per emettere vari colori di fluorescenza. Successivamente, viene osservato attraverso l'ingrandimento della lente dell'obiettivo e dell'oculare. In questo modo, anche con una fluorescenza debole, è facilmente riconoscibile e altamente sensibile su sfondi a forte contrasto. Viene utilizzato principalmente per studiare la struttura, la funzione e la composizione chimica delle cellule.
La microscopia a fluorescenza può essere divisa in due tipi: tipo a trasmissione e tipo a caduta. Il primo è più primitivo, mentre il secondo è più avanzato. La struttura di base dei due tipi di microscopi a fluorescenza è simile, con la differenza principale che la luce di eccitazione trasmessa passa attraverso il campione, producendo la fluorescenza nel suo insieme. La fluorescenza entra quindi nella lente dell'obiettivo e maggiore è l'ingrandimento, più debole è la fluorescenza; La luce di eccitazione cadente si proietta sulla superficie del campione, producendo fluorescenza che entra nella lente dell'obiettivo. Maggiore è l'ingrandimento, più forte è la fluorescenza, rendendolo adatto per l'osservazione ad alta potenza. I componenti principali di un microscopio a fluorescenza includono una sorgente luminosa con lampada al mercurio, una piastra del filtro di eccitazione, uno spettrofotometro (tipo a goccia), una piastra del filtro di soppressione e un condensatore del campo scuro (tipo a trasmissione). Inoltre, a causa del forte riscaldamento delle lampade al mercurio, la maggior parte di esse è dotata anche di filtri che assorbono il calore. Alcuni microscopi a fluorescenza hanno anche un obiettivo a contrasto di fase e un'apertura circolare, che consente l'osservazione a contrasto di fase. Alcuni microscopi a fluorescenza adottano una struttura invertita, che è anche un microscopio invertito, e così via.
Inoltre, i microscopi sopra menzionati possono essere assemblati in microscopi digitali installando il CCD, che converte le immagini fisiche viste dal microscopio in immagini analogiche digitali e le visualizza su un computer. Di conseguenza, possiamo spostare la nostra ricerca nel microcampo dalla tradizionale osservazione binoculare alla riproduzione attraverso display, migliorando così l'efficienza del lavoro.
