Hai mai compreso i principi di base della microscopia a contrasto di fase?
Il microscopio a contrasto di fase è stato inventato dallo scienziato olandese Zernike nel 1935 per osservare campioni non colorati. Per le cellule viventi e i campioni biologici non colorati, a causa della differenza nell'indice di rifrazione e nello spessore della microstruttura di ciascuna parte della cellula, quando l'onda luminosa passa attraverso, la lunghezza d'onda e l'ampiezza non cambiano, cambia solo la fase (differenza di ampiezza ), invisibile all'occhio umano. osservare. Il microscopio a contrasto di fase modifica la differenza di fase e utilizza fenomeni di diffrazione della luce e di interferenza per modificare la differenza di fase in una differenza di ampiezza per osservare cellule viventi e campioni non colorati. La differenza tra un microscopio a contrasto di fase e un normale microscopio è che viene utilizzato un diaframma anulare invece di un diaframma variabile, viene utilizzata una lente dell'obiettivo con una piastra di fase invece di una normale lente dell'obiettivo e viene fornito un telescopio per la coassialità.
Principi di base della microscopia a contrasto di fase:
Utilizzando la differenza di indice di rifrazione e spessore tra i diversi componenti strutturali dell'oggetto, la differenza del percorso ottico che passa attraverso diverse parti dell'oggetto viene convertita nella differenza di ampiezza (intensità della luce), e attraverso la lente del condensatore con un diaframma anulare e il differenza di fase con un piatto di fase La lente dell'obiettivo realizza il microscopio di osservazione. Viene utilizzato principalmente per osservare cellule viventi o sezioni di tessuto non colorate e talvolta può essere utilizzato anche per osservare campioni colorati privi di contrasto.
La differenza del percorso ottico della luce visibile che passa attraverso il campione viene trasformata in una differenza di ampiezza, migliorando così il contrasto tra le varie strutture e rendendo le varie strutture chiaramente visibili. La luce viene rifratta dopo essere passata attraverso il campione, devia dal percorso ottico originale ed è ritardata di 1/4λ (lunghezza d'onda). Se viene aumentato o diminuito di 1/4λ, la differenza del percorso ottico diventa 1/2λ ei due raggi interferiscono dopo l'asse di luce Rafforzare, aumentare o diminuire l'ampiezza, migliorare il contrasto.
Il microscopio a contrasto di fase ha due funzioni che altri microscopi non hanno: ① separa la luce diretta (luce di fondo nel campo visivo) dalla luce diffratta dall'oggetto; ② rimuove circa la metà della lunghezza d'onda dalla fase in modo che non possa interagire, determinando un cambiamento di intensità.
