Metodo di rilevamento al microscopio a fluorescenza
microscopio a fluorescenza
La microscopia a fluorescenza è uno strumento fondamentale per la citochimica dell'immunofluorescenza. È composto da componenti principali come sorgente luminosa, sistema di piastre filtranti e sistema ottico. Utilizza una determinata lunghezza d'onda della luce per eccitare il campione ed emettere fluorescenza, che viene ingrandita attraverso un obiettivo e un sistema oculare per osservare l'immagine fluorescente del campione (Figura 1).
(1) Sorgente luminosa
Al giorno d'oggi, come sorgente luminosa viene comunemente utilizzata una lampada al mercurio ad altissima pressione da 200 W. È fatto di vetro al quarzo, con una forma sferica al centro e al suo interno è riempita una certa quantità di mercurio. Durante il funzionamento, la scarica tra i due elettrodi provoca l'evaporazione del mercurio e la pressione all'interno della sfera aumenta rapidamente. Quando il mercurio evapora completamente, può raggiungere le 50-70 pressioni atmosferiche standard, che generalmente richiedono circa 5-15 minuti. La luminescenza delle lampade al mercurio ad altissima pressione è il risultato della scarica tra gli elettrodi, che dissocia e riduce continuamente le molecole di mercurio ed emette fotoni. Emette una forte luce ultravioletta e blu-viola, sufficiente per eccitare varie sostanze fluorescenti, pertanto è ampiamente utilizzato nei microscopi a fluorescenza.
Precauzioni per l'uso del microscopio a fluorescenza
(1) Seguire rigorosamente le istruzioni del produttore del microscopio a fluorescenza e non modificare il programma in modo arbitrario.
(2) L'ispezione deve essere condotta in una stanza buia. Dopo essere entrato nella camera oscura, collega l'alimentazione e accendi la lampada al mercurio ad altissima pressione per 5-15 minuti. Dopo che la sorgente luminosa ha emesso una luce forte e si è stabilizzata, gli occhi dovrebbero adattarsi completamente alla camera oscura prima di iniziare a osservare il campione.
(3) Per evitare danni UV agli occhi, è necessario indossare occhiali protettivi quando si regola la sorgente luminosa.
(4) Il tempo di ispezione dovrebbe essere di 1-2 ore ogni volta. Se supera i 90 minuti, l'intensità luminosa della lampada al mercurio ad altissima pressione diminuisce gradualmente e la fluorescenza si indebolisce; Campioni esposti alle radiazioni ultraviolette per 3-5 giorni
Dopo un minuto anche la fluorescenza è diminuita significativamente; Pertanto, la durata massima non deve superare le 2-3 ore.
(5) La durata della sorgente luminosa del microscopio a fluorescenza è limitata e il campione deve essere esaminato a livello centrale per risparmiare tempo
Risparmia tempo e proteggi la sorgente luminosa. Quando fa caldo, è necessario aggiungere un ventilatore elettrico per dissipare il calore e rinfrescarsi. Quando si sostituisce una nuova lampadina, il tempo di utilizzo deve essere registrato dall'inizio. Quando la luce è spenta e si vuole riutilizzarla, è necessario attendere che la lampadina si raffreddi sufficientemente prima di accenderla. Evitare di accendere la fonte luminosa più volte al giorno.
(6) Osservare il campione immediatamente dopo la colorazione, poiché la fluorescenza si indebolirà gradualmente nel tempo. Se il campione viene conservato in un sacchetto di plastica di polietilene a 4 gradi, è possibile ritardare il tempo di attenuazione della fluorescenza e impedire l'evaporazione dell'agente di montaggio.
(7) I criteri di giudizio per la luminosità della fluorescenza sono generalmente divisi in quattro livelli, vale a dire "uno" - fluorescenza debole o assente. "+" - È visibile solo la fluorescenza visibile. ++- Visibile con fluorescenza brillante. "+++" - Fluorescenza visibile e abbagliante.
