Funzionamento di base del microscopio a fluorescenza
UN. Spegni le luci nella stanza e accendi la lampada al mercurio del microscopio;
B. Selezionare il filtro corrispondente in base alla fluoresceina etichettata dal campione;
C. Posiziona il campione e trova un campo visivo adatto;
D. Se è necessario scattare foto, verificare che la pellicola a colori sia installata nella fotocamera;
e. Accendi il dispositivo Selfie, seleziona la marcia manuale, in genere la velocità di scatto è entro 0.5-10 secondi;
F. Dopo l'uso, spegnere tutta l'alimentazione e registrare l'utilizzo. IL
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3. Metodo di registrazione dell'immagine di fluorescenza
L'immagine di fluorescenza vista dal microscopio a fluorescenza ha sia caratteristiche morfologiche che colore e luminosità della fluorescenza. Quando si giudicano i risultati, i due devono essere combinati per un giudizio completo. I risultati sono registrati sulla base di indicatori soggettivi, ovvero l'osservazione visiva da parte dei lavoratori. Come osservazione qualitativa generale, sostanzialmente attendibile. Con lo sviluppo della tecnologia e della scienza, vengono utilizzati indicatori oggettivi per registrare i risultati del giudizio a vari livelli, come spettrofotometri cellulari, analizzatori di immagini e altri strumenti. Tuttavia, i risultati registrati da questi strumenti devono essere combinati anche con giudizi soggettivi. IL
La fotografia al microscopio a fluorescenza è molto necessaria per la registrazione di immagini a fluorescenza. Poiché la fluorescenza è facile da sbiadire e indebolirsi, è necessario registrare i risultati in tempo reale. Il metodo è fondamentalmente lo stesso di quello della normale fotomicrografia. Ho solo bisogno di usare una pellicola fotosensibile ad alta velocità. Poiché la luce ultravioletta ha un forte effetto sull'estinzione della fluorescenza, come i marcatori FITC, la luminosità della fluorescenza diminuirà del 50% se irradiata con luce ultravioletta per 30 secondi. Pertanto, se la velocità di esposizione è troppo lenta, non è possibile acquisire l'immagine fluorescente. I microscopi a fluorescenza per la ricerca generale dispongono di dispositivi di sistema di fotomicrografia semiautomatici o completamente automatici. IL
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4. Precauzioni per l'uso della microscopia a fluorescenza
UN. Operare rigorosamente in conformità con i requisiti delle istruzioni di fabbrica del microscopio a fluorescenza e non modificare il programma a piacere. IL
B. L'ispezione deve essere effettuata in una stanza buia. Dopo essere entrato nella camera oscura, collega l'alimentatore e accendi la lampada al mercurio ad altissima pressione per 5-15 minuti. Dopo che la forte luce della sorgente luminosa si è stabilizzata, gli occhi si sono completamente adattati alla camera oscura e quindi iniziano a osservare l'esemplare. IL
C. Per prevenire i danni dei raggi ultravioletti agli occhi, indossare occhiali protettivi durante la regolazione della sorgente luminosa. IL
D. Il tempo di ispezione è preferibilmente di 1-2 ore ogni volta. Se supera i 90 minuti, l'intensità luminosa della lampada al mercurio ad altissima pressione diminuirà gradualmente e la fluorescenza si indebolirà; dopo che il campione è stato irradiato con luce ultravioletta per 3-5 minuti, anche la fluorescenza sarà significativamente indebolita; pertanto, non dovrebbe superare 2-3 ore al massimo. . IL
e. La durata della sorgente luminosa del microscopio a fluorescenza è limitata e i campioni devono essere controllati centralmente per risparmiare tempo e proteggere la sorgente luminosa. Quando fa caldo, dovrebbero essere aggiunti ventilatori per dissipare il calore e le nuove lampadine dovrebbero essere registrate dall'inizio del loro tempo di utilizzo. Quando si desidera riutilizzarla dopo che la lampada si è spenta, è necessario attendere che la lampadina si sia sufficientemente raffreddata prima di accenderla. Evitare di accendere la fonte di luce più volte al giorno. IL
F. Osservare il campione subito dopo la colorazione, poiché la fluorescenza si indebolirà gradualmente nel tempo. Se il campione viene conservato in un sacchetto di plastica in polietilene a 4 gradi, il tempo di indebolimento della fluorescenza può essere ritardato e l'agente di montaggio può essere impedito dall'evaporazione. IL
G. Standard di giudizio della luminosità della fluorescenza: è generalmente diviso in quattro livelli, ovvero "-" significa che si può vedere una fluorescenza assente o debole. "più" significa che è stata osservata solo una fluorescenza chiaramente visibile. "plus plus" significa che è visibile una fluorescenza brillante. "plus plus plus" significa fluorescenza luminosa visibile.
